下調(diào)hotair表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌及其癌干細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和致瘤性的影響

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1、來(lái)兩扛參碩±學(xué)位論文下調(diào)ＨＯＴＡＩ民表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌及其癌干細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和致瘤性的影響專業(yè)名稱：免疫學(xué)研究生姓名：倪巧巧導(dǎo)師姓名；安巧Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｏｗｎｒｅｇ山ａｔｅｄＩｎｃＲＮＡＨＯＴＡＩＲ灼ｒｅｓｓｉｏ田ｏｎｔｈｅｉｎｖａｓｉｏｎｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄ中，ｔｕｍｏｒｉｅｎｉｃｉｔｏｆｈｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｇｙＬｏＶｏｃｅｌｌｓａｎｄＣＳＣｓＡＴｈｅｓｉｓＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＳｏｕｔｈｅ

2、ａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｏｒｔｈｅＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ巧ＮｉＹａｏａｏｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＭａ６２０１５ｙ，東南大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)巧聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究王作及取得的研究成果，。盡我所知除了文中特別化Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得東南大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證

3、書而使用過(guò)的材料一。與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。－－礙猜日期１？研究生簽名：該：１東南大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明東南大學(xué)、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所、國(guó)家圖書館有權(quán)保留本人所送交學(xué)位論文，可Ｗ采用影印的復(fù)印件和電子文檔、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。本人電子文擋一的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相致，允許論文被查閩和借。除在保密期內(nèi)的保密論文外閱，可Ｗ公布（包括刊登）論文的全部或部分內(nèi)容。論文的公布（包括刊登）授權(quán)東南大學(xué)研究生院辦理。＇

4、ｒ研究生簽名：導(dǎo)師簽名ＶａＡ日期；ｉ中文摘要下調(diào)ＨＯＴＡＩ民表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌及其癌干細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和致瘤性的影響中文摘要結(jié)直腸癌起源于粘膜上皮或粘膜下間葉組織，是由結(jié)直腸粘膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下發(fā)生的惡變一，是最常見的消化道惡性腫瘤之。在各類惡＝性腫瘤中，結(jié)直腸癌的發(fā)病率居第位，占胃腸道腫瘤的第二位。結(jié)直麻癌治療手術(shù)、放化療為主，因其極易侵犯血管、淋己結(jié)轉(zhuǎn)移甚至遠(yuǎn)處而增加Ｉ根巧的難度。結(jié)直腸癌是上皮源性的腫痛，上皮細(xì)胞之所Ｗ惡性病變進(jìn)而轉(zhuǎn)移，可能涉及到

5、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ化ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥＭＴ）。一近年來(lái)，非編碼ＲＮＡ作為表觀遺傳學(xué)研究?jī)?nèi)容之，從?。遥危恋介L(zhǎng)鏈非編碼ＲＮＡ（ＬｎｃＲＮＡ），在腫瘤中已被廣泛探究。ＨＯＸ杜ａｎｓｃｒｉｐｔａｎｔｉｓｅｎｓｅＲＮＡ一（ＨＯＴＡＩＲ）作為ＬｎｃＲＮＡ大家族的成員之，在乳腺癌、肺癌、前列腺癌和結(jié)直腸癌等腫瘤中己有較多的研究報(bào)道。盡管如此，ＨＯＴＡＩＲ在結(jié)直腸癌及其癌干細(xì)胞（ｃａｎｃｅｒＳｔｅｍｃｅ化，ＣＳＣｓ）中的分子生物學(xué)特性

6、仍知之甚少。本研究選擇人結(jié)直腸癌細(xì)胞系ＬｏＶｏ細(xì)胞系作為研究對(duì)象，針對(duì)ＨＯＴＡＩＲ編碼基因設(shè)計(jì)合成小發(fā)夾ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｈａｉｒｐｉｎＲＮＡ），利用ＲＮＡｉ的方法，將構(gòu)建好的真核ＳｈＲＮＡ表達(dá)載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至ＬｏＶｏ細(xì)胞，來(lái)降低ＨＯＴＡ化表達(dá)水平，并分選出結(jié)直腸癌ＣＳＣｓ，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞生物學(xué)特性改變，探討ＨＯＴＡ化是否可作為結(jié)直腸癌ＣＳＣｓ治療的新觀點(diǎn)。目的：探討抑制結(jié)人結(jié)直腸癌ＬｏＶｏ細(xì)施及其ＣＳＣｓ中ＨＯＴＡＩＲ的表達(dá)，對(duì)癌細(xì)胞増殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和致瘤性的影響，為進(jìn)行ＷＨ

7、ＯＴＡＩＲ為鉛點(diǎn)的結(jié)直腸癌治療提供依據(jù)。方法：Ｓｕｅｒｉｏｒ－ＥＧＦＰＷｐｌ為載體構(gòu)建的ＳｈＲＮＡ重組質(zhì)粒，通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染ＬｏＶｏ細(xì)－，經(jīng)Ｇ４１８篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株后胞，用ＱＲＴＰＣＲ檢測(cè)ＨＯＴＡＩＲ的表達(dá)。通過(guò)ＬｏＶｏ細(xì)胞體外增道能力、耐藥能力、克隆形成能力、轉(zhuǎn)移侵襲能力、體內(nèi)致瘤性等實(shí)驗(yàn)，綜合分析下調(diào)ＨＯＴＡＤＩ表達(dá)后對(duì)ＬｏＶｏ細(xì)胞生物學(xué)恃性的影響。進(jìn)而，通過(guò)免疫磁珠分選出結(jié)直腸癌ＣＳＣｓ，用上述方法及免疫組化和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ方法對(duì)其侵襲一、轉(zhuǎn)移和致瘤性Ｗ及上皮

8、間質(zhì)轉(zhuǎn)化（ＥＭＴ）相關(guān)分子表達(dá)做進(jìn)步分析。結(jié)果：ＬＲＴ－ＰＣ民檢測(cè)證實(shí)在結(jié)直腸癌細(xì)ｏＶｏ中ＨＯＴＡ胞Ｌ存在ＩＲ的表達(dá)；結(jié)直腸癌ＣＳＣｓ差異有顯著性意義＞島表達(dá)１１０了乂化，與１＾〇￥〇細(xì)胞相比，（ｉ＜０．０５）。２．構(gòu)建的真核重組表達(dá)載體經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染ＬｏＶｏ細(xì)胞，經(jīng)Ｇ４１８成功篩選出穩(wěn)定表達(dá)Ｉ東南大學(xué)碩±學(xué)位論文一的細(xì)胞株－－。ＱＲＴＰＣＲ檢測(cè)結(jié)果表明，構(gòu)建的Ｈ