不同淡水魚類維氏氣單胞菌的分離鑒定及耐藥性分析

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1、分類號：S942.2單位代碼：10193密級：公開學(xué)號：2012652碩士學(xué)位論文不同淡水魚類維氏氣單胞菌的分離鑒定及耐藥性分析IsolatedidentificationanddrugresistanceanalysisofAeromonasveroniifromdifferentfreshwaterfishspecies作者姓名：葛錚學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)名稱：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：動物疾病防治指導(dǎo)教師：高云航副教授所在學(xué)院：動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院2015年3月本研究由國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31201927）國家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013IK163）聯(lián)合資助Funded

2、byNationalNaturalScienceFoundationofChina（No.31201927）andAQSIQscienceandtechnologyprojects（No.2013IK163）獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。盡我所知，除文中特別加以標(biāo)注和致謝所列內(nèi)容外，論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。本學(xué)位論文所有內(nèi)容若有不實(shí)之處，本

3、人愿意承擔(dān)一切相關(guān)法律責(zé)任和后果。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明1、本人完全了解吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間所完成的論文及相關(guān)成果的知識產(chǎn)權(quán)屬吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，并同意將本論文的版權(quán)授權(quán)給吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。2、本人（同意/不同意，務(wù)必打印后填寫）吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)將本論文版權(quán)授權(quán)給不同媒體進(jìn)行電子出版、多媒體出版、網(wǎng)絡(luò)出版以及其他形式出版（涉密學(xué)位論文解密后應(yīng)遵守此協(xié)議）。3、本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀

4、研究生學(xué)位期間完成的論文及相關(guān)的學(xué)術(shù)成果，必須以吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)作為第一署名單位。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日指導(dǎo)教師簽名：簽字日期：年月日摘要維氏氣單胞菌作為重要的水生生物病原菌以及人畜共患病病原菌，不僅給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，而且病原可通過水源性、食源性以及傷口感染等方式傳播，引起人類發(fā)生肺炎、敗血癥以及食物中毒等病癥。同時，由于養(yǎng)殖業(yè)者對各種抗菌藥物的不合理應(yīng)用，使維氏氣單胞菌的耐藥性不斷產(chǎn)生，從而給淡水魚類疾病的預(yù)防和控制帶來新的困難。本研究以東北地區(qū)不同淡水魚類維氏氣單胞菌為研究對象，通過病原分離與鑒定、耐藥性分析、整合酶檢測及耐藥基因盒分析，明確東北

5、地區(qū)不同淡水魚類維氏氣單胞菌感染情況、耐藥情況以及耐藥性基因多樣性，進(jìn)而為指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖臨床用藥以及進(jìn)一步研究其耐藥機(jī)制等提供理論依據(jù)。1.不同淡水魚類維氏氣單胞菌的分離與鑒定通過流行病學(xué)調(diào)查，采集東北三省不同地域、不同品種魚類爆發(fā)的維氏氣單胞菌病疑似病料，經(jīng)分離培養(yǎng)、涂片鏡檢、生理生化鑒定、致病性試驗(yàn)及16SrDNA序列分析，結(jié)果共分離出52株具有明顯致病性的維氏氣單胞菌，且不同菌株致病性及生物學(xué)特征存在一定的差異。2.不同淡水魚類維氏氣單胞菌耐藥情況分析采用微量肉湯稀釋法測定從臨床發(fā)病的淡水魚類中分離獲得的52株維氏氣單胞菌的最小抑菌濃度，分析其耐藥情況，以期為指導(dǎo)水

6、產(chǎn)臨床用藥提供一定的參考。結(jié)果分離得到的52株維氏氣單胞菌存在比較嚴(yán)重的耐藥性，且不同地域分離的維氏氣單胞菌菌株對常用的抗菌藥物的MIC結(jié)果存在明顯差異。其中對慶大霉素、阿莫西林、紅霉素全部耐藥；對阿米卡星和阿奇霉素的耐藥率較高；其次是環(huán)丙沙星、強(qiáng)力霉素和恩諾沙星，耐藥率分別為78.85%、63.46%和57.69%；氟苯尼考和氯霉素的耐藥率最低，分別為15.38%和11.54%；同時出現(xiàn)了多重耐藥情況，分別為6重耐藥、7重耐藥、8重耐藥、9重耐藥、10重耐藥和全部耐藥。其中8重耐藥和9重耐藥分布最廣，分別是26.92%和36.54%。3.維氏氣單胞菌整合酶檢測及陽性整

7、合子耐藥基因盒分析對分離獲得的52株維氏氣單胞菌進(jìn)行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶檢測，并對整合酶陽性的菌株進(jìn)行3′保守區(qū)及可變區(qū)耐藥基因盒確定及序列分析。結(jié)果所有分離獲得的維氏氣單胞菌對Ⅰ型整合子的攜帶情況是100%，所有菌株不攜帶Ⅱ、Ⅲ型整合子；且其Ⅰ型整合子結(jié)構(gòu)均完整，存在含有sulⅠ、qacE及ORF5基因的3′保守區(qū)，其中14株Ⅰ型整合子結(jié)構(gòu)I完整的維氏氣單胞菌中存在耐藥基因盒，其耐藥基因盒的檢出率為26.92%。14株菌共存在4種不同的耐藥基因盒，分別為aadA1-catB、drfA-orfF-aadA1、aac（6′）-Ib-cr-ar