產(chǎn)甜甙v羅漢果內(nèi)生真菌的研究

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1、￣￣單位代碼１０６０２Ｉ學號２０１２０１巧１４分類號Ｘ１７２級公開方心／？作働吁據(jù)ＧＵＡＮＧＸＩＮＯ口ＭＡＬＵＮＩＶ巨口ＳＩＴＹ碩去學化冷文產(chǎn)甜武Ｖ羅漢果內(nèi)生真菌的研究ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＭｏｇｒｏｓｉｄｅＶｐｒｏｄｕｃｉｎｇＥｎｄｏｈｔｉｃＦｕｎｕｓｐｙｇｆｒｏｍＳｉｒａｉｔｉａｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉｇ學院：環(huán)境與資源學院專業(yè)：環(huán)境王程研究方向：資源開發(fā)與利用年級；２０１２級研究生：蔣智指導教師；謠斌完成日期：２０１５年６月產(chǎn)甜成Ｖ羅漢果內(nèi)生真菌的研究

2、專業(yè)名稱：環(huán)境王程申請人：蔣智指導教師；謠域論文答辯姜員會Ｉ主席＇：節(jié)帝委員：秦考廣西師范大學碩±研究生論文產(chǎn)甜祇Ｖ羅漢果內(nèi)生真菌的研究研究生：蔣智導師！堪斌專業(yè)！環(huán)境工程研究方向；資源開發(fā)與利用年級：２０口級中文摘要羅漢果（況ｒａ伽［ｍｓｖｅｎｏ已被確認。羅漢果甜ｇ哨屬于葫蘆科植物，其食品和藥品價值巧是一種從羅奴果果實里提取的低熱量、高甜度、健康的天然甜味劑，而甜巧Ｖ又是其一０－中的主要成分．５１．４％，在羅紋果干果中占比為，是種葫蘆燒Ｈ蔭糖昔類化合物。同時人們希望找到合適的內(nèi)生真菌能

3、夠產(chǎn)出有用的代謝產(chǎn)物，從而將內(nèi)生真茜可發(fā)展成一種重要的生物資源。近年來的研究表明，內(nèi)生真菌與宿主協(xié)同進化，可Ｗ產(chǎn)生與宿主相同或相似的代謝產(chǎn)物，對相應的內(nèi)生真菌及其代謝產(chǎn)物的研究已經(jīng)成為尋找重要代謝－產(chǎn)物的種新途經(jīng)，。因此如果從羅沒果中分離出的內(nèi)生真菌能產(chǎn)生與宿主相同的次生一代謝物如甜戒Ｖ，這將成為種獲取甜式Ｖ的新途徑。本文通過對采自廣西永?？h羅漢果植株的根、莖、葉和果實中的內(nèi)生真菌進行分離，篩選出可產(chǎn)生甜巧Ｖ的真菌、Ｗ及優(yōu)、用形態(tài)學和分子生物學方法對菌株種屬進行鑒定化菌株產(chǎn)甜巧Ｖ的發(fā)酵條件，為研究提供了重要理論依據(jù)。現(xiàn)將取得

4、的主要研究成果歸納如下：１、內(nèi)生真菌的分離和培養(yǎng)。通過ＰＤＡ固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，從羅漢果組織內(nèi)分離出１５種內(nèi)生真菌，４株分離自葉，４株分離自莖，２株分離自根，５株分離自果實。２、產(chǎn)甜武Ｖ內(nèi)生真菌的篩選。使用高效液相色譜分析發(fā)酵液中甜巧Ｖ的存在。通過比較標準品和樣品的保留時間來判斷甜巧Ｖ的有無－ＭＳ。產(chǎn)武菌株也通過ＨＰＬＣ和ＬＣ－（－Ｆ５和ＬＨＧ－Ｌ４的內(nèi)生真菌技術被篩選出來編號為ＬＨＧ，其中ＬＨＧＦ５甜巧Ｖ產(chǎn)量為ｍＬ－３乂，ＬＨＧ６７５／ｍＬ）。１４惦／Ｌ４甜祇Ｖ產(chǎn)量為２．帖３、產(chǎn)甜武Ｖ內(nèi)生真菌的鑒定。采用經(jīng)典

5、的形態(tài)學鑒定和電鏡掃描的方式對編號為－ＬＨＧ－Ｆ５和ＬＨＧＬ４的真菌的菌絲及抱子顯微形態(tài)進行觀察，隨后對這兩株產(chǎn)甜巧內(nèi)生－ｒＤＮＡ－真菌的ＩＴＳ序列進行系統(tǒng)發(fā)育分析。通過ＩＴＳ序列分析技術將ＬＨＧＦ５菌株鑒定－為當歸間座殼菌（Ｚ）崎ｗＡｅａｎｇｅ／心ｅ），將ＬＨＧＬ４菌株鑒定為腐皮鎌刀菌（ＦｗａＷｗｗｓｏｌａｎＯ。Ｉ廣西師范大學碩±研究生論文４、產(chǎn)甜巧Ｖ真菌的發(fā)酵條件優(yōu)化。采用單因素和正交試驗方法對甜巧Ｖ產(chǎn)量較高ＬＨＧ－Ｆ５－的菌株生長的營養(yǎng)因素和環(huán)境因素進行優(yōu)化。確定了ＬＨＧＦ５產(chǎn)甜祈Ｖ的最優(yōu)－發(fā)酵條件，Ｌ

6、ＨＧＦ５的最優(yōu)發(fā)酵方法是在ｌＯ／Ｌ馬鈴著液體培養(yǎng)基的基礎上，加上ｇ葡萄糖為補充碳源，２．５ｇ／Ｌ的硫酸Ｓ為補充氮源，培養(yǎng)基裝液量為２５〇１１１１＾呈角瓶裝液１５０ｍＬ，發(fā)酵時間為’５天，發(fā)酵溫度為２８Ｃ，初始Ｈ值為７。檢測產(chǎn)物中甜祇Ｖ的含量達到ｐ７．１５６惦／ｍＬ，是進行發(fā)酵條件優(yōu)化前甜武Ｖ產(chǎn)量的１．８７倍。關鍵詞：羅漢果；內(nèi)生真菌；甜式Ｖ；菌種鑒定；發(fā)酵條件優(yōu)化ＩＩ廣西師范大學碩±硏究生論文ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＭｏｇｒｏｓｉｄｅＶｐｒｏｄｕｃｉｎＥｎｄｏｈｔｉｃＦｕｎｕｓｇｐｙｇｆｒｏｍＳｉｒａｉｔｉａ

7、ｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉｇＣａｎｄｉｃａｔｅ：ＪｉａｎｇＺｈｉＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＣｈｅｎＢｉｎＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＧｒａｄｅ：２０１２民ｅｓｅａｒｃｈｄｉｒｅｃｔｉｏｎ：民ｅｓｏｕｒｃｅｓＤｅｖｅｌｏｍｅｎｔｎｄＵｉｌｉｚａｉｏｎｐａｔｔＡｂｓｔｒａｃｔＳｉｒａｉｔｉａｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ，ｂｅｌｏｎｇｉｎｇｔｏｔｈｅｆａｍｉｌｙｏｆＣｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ．Ｉｔｓｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎａｌａｎｄｅｄｅｖａｕｓ

8、ｅｅｎｉｒｍｅｉｂｌｌｅｈａｂｃｏｎｆｄ．Ｍｏｇｒｏｓｉｄｅｓａｒｏｕｏｆｔｒｉｔｅｒ