哈茨木霉菌多菌靈抗性選育與β-微管蛋白突變位點研究

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1、Universitycode：10223Classifiedcode：Q93Graduatenumber：XS1291001Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationBreedingofTrichodermaharzianumcarbendazimresistanceandthestudyofβ-tubulinmutantsitePostgraduate：YuChunshengSuper

2、visor：ProfesserSunDongmeiMajor：MicrobiologyMicrobialResourcesandResearchdirection：UtilizationCollegeofLifeScienceandCollege：TechnologyDaqingChinaJune,2015摘要當今農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，化學殺菌劑仍然作為主要的植物真菌病害防治手段。植物生防菌具有化學殺菌劑所不具備的多種優(yōu)點，但對化學殺菌劑敏感，二者在植物病害防治上具有一定的互補作用。所以，選育可耐受化學農(nóng)藥的生防菌

3、菌株對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有著重要意義。本研究利用紫外線-氯化鋰復(fù)合誘變法對哈茨木霉出發(fā)菌株hc進行多菌靈抗藥性誘變，獲得抗性突變株315株，利用PCR方法分析其β-微管蛋白基因序列，篩選到3株在β-1微管蛋白基因編碼區(qū)上引起單個氨基酸水平突變的堿基突變菌株，并對其中抗多菌靈能力最強的突變菌株hc-9進行進一步研究。利用含藥平板檢測多菌靈對突變菌株的抑菌有效中濃度變化。結(jié)果證實，多菌靈對突變株hc-9的抑菌有效中濃度較出發(fā)菌株hc提升285%，且經(jīng)轉(zhuǎn)接12代后，該突變菌株對多菌靈的耐藥能力相對穩(wěn)定；利用對峙培養(yǎng)及載玻

4、片法研究突變株對不同病原真菌的抑菌效果，發(fā)現(xiàn)該菌株的抑菌效果與出發(fā)菌株hc相比無明顯差異，且對病原菌仍具有重寄生能力；以察氏培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，改變其中的碳、氮源，培養(yǎng)溫度及pH，并利用不同鹽濃度與PEG模擬鹽脅迫與干旱脅迫，研究突變株hc-9的生理特性變化。發(fā)現(xiàn)在上述條件下，突變株hc-9的菌絲生長速率皆小于出發(fā)菌株hc，但不同條件下變化趨勢一致。以大豆為研究對象，利用盆栽實驗，測定不同土壤處理樣品中大豆苗期地上與地下部分幾種生理指標(三種抗氧化酶活性以及丙二醛(MDA)、可溶性蛋白含量)，研究哈茨木霉

5、hc菌株及其突變株hc-9的應(yīng)用前景。結(jié)果表明：與病原菌處理組相比，添加哈茨木霉出發(fā)菌株hc與其突變株hc-9及多菌靈的處理均有提高根系與葉片中的各種抗逆酶活性，降低丙二醛含量的能力。其中病原菌+哈茨木霉突變菌株的葉片及根系的SOD酶(超氧化物歧化酶)、CAT酶(過氧化氫酶)活性提高幅度均較大；而病原菌+多菌靈的處理MDA含量降低最多，該處理葉片中MDA含量為0.022μmol/g，降低43.59%；但同時添加多菌靈與突變株hc-9的處理變化表現(xiàn)與單獨添加哈茨木霉菌與多菌靈表現(xiàn)不一致，例如無論是葉片和根系

6、中的SOD酶活性均低于其它各處理。葉片接種大豆菌核病核盤菌后，測定接菌后不同處理抗氧化酶活性變化，其中SOD，POD酶活提高速度均大于CK對照組，MDA含量各處理均小于CK對照組。本實驗結(jié)果為今后對哈茨木霉菌的研究與綜合應(yīng)用提供了科學依據(jù)。關(guān)鍵詞：哈茨木霉，多菌靈，抗藥性誘變，生理指標，應(yīng)用IAbstractInthecurrentagricultueproduction,chemicalfungicidestillplaysanimportantroleincontrollingofplantfunga

7、ldiseases.Plantbiocontrolmicroorganismshavevariousadvantagesthatchemicalfungicidesdonothave,buttheyarealsosensitivetochemicalfungicide.Thesetwomethodshavecertaincomplementaryfunctioninplantdiseasecontrol.Soitisimportanttobreedbiologicalmicroorganismthatha

8、vethetoleranceabilitytochemicalfungicideintheagriculture.TrichodermaharzianumstartingstrainhcwasmutatedbyUVandLiClcomplexmutationmethodintheresistanceabilityonCarbendazim，315strainsofresistantmutantswasobtained.Usin