微流控芯片高效捕獲乳腺癌細(xì)胞mda-mb-231及再培養(yǎng)研究

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1、■？．．掌堯乂遂碩±學(xué)位論文－－２３微流控芯片高效捕獲乳胺癌細(xì)胞ＭＤＡ服１及再培養(yǎng)研究－－ＩＭＢ２３１ＨｃａａｔｕｒｅｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅＩＭＤＡｉｈｅｆｆｉＣｉｅｎｔｇｉａｎｄＲｅ－ｃｕｌｔｕｒｅｂｙｕｓｉｄｉｃＣｈｉｉｎｇＭｉｃｒｏｆｌｕｐ學(xué)號(hào)Ｄ１２２０１０４１姓名桑維維學(xué)位類別理學(xué)碩±造說生物化學(xué)自分子生物指導(dǎo)教師邢更妹研究員完成時(shí)間２０１５年５月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下迸斤的硏巧工作及取得的研究成果。據(jù)我

2、所知，論文中不包含其，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安歡大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的一學(xué)位或證書而使用過的材料。與我同工作的同志對(duì)本驕究所數(shù)的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期；年歹月誠(chéng)日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書、本學(xué)位論文作者完全了解安藏大學(xué)有關(guān)保留使用學(xué)化論文的規(guī)定，有權(quán)。保留并向國(guó)家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被繪閱和借爾本人授權(quán)安敏大學(xué)可Ｗ將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)踞摔迸巧檢索，可Ｕ采煙影印。、縮印或掃描等

3、贊制手段保存、匯編學(xué)位論支（保密的學(xué)位論文在解密適巧本授權(quán)書）、么於＿＿＾：；（１學(xué)值論文作者簽名；導(dǎo)師簽名＾＾｜■：簽字円期＾；義０您半月／曰；化年Ｊ月）家日簽字曰期學(xué)位論文作者畢業(yè)去向；工作單位：電話：：通訊地址：郵編Ｉ＾摘要近年來，乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率高，大多與抑癌基因發(fā)生基因突變密切相關(guān)，從而導(dǎo)致正常細(xì)胞癌變。惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移是癌癥患者病情復(fù)發(fā)或者死亡的主要原因。傳統(tǒng)的用于檢測(cè)腫瘤的方法如血清腫瘤標(biāo)志物和影像一學(xué)診斷對(duì)腫瘤發(fā)生早期的檢出率均較低，所Ｗ有效地檢測(cè)腫瘤早期的微

4、小轉(zhuǎn)移直是臨床醫(yī)學(xué)面臨的挑戰(zhàn)。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｄｌｓ，ＣＴＣｓ）是存在于很多腫瘤患者體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞，，它由原發(fā)灶脫落后進(jìn)入人體循環(huán)或琳己系統(tǒng)并通過外周血轉(zhuǎn)移至ｅ－遠(yuǎn)端的組織或者器官甚至遍布全身。循環(huán)腫瘤細(xì)胞具有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換（ｐｉｔｈｅｌｉａｌｍｍａ一ｅｓｅｎｃｈｙｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ，ＥＭＴ）和些腫瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性，所ｙ？在循環(huán)系統(tǒng)中能夠進(jìn)入血管、快速增殖并形成轉(zhuǎn)移瘤。很多研究都表明循環(huán)腫瘤細(xì)胞的迂移、粘附等與癌癥的轉(zhuǎn)移和預(yù)后復(fù)發(fā)均有密切關(guān)系。所Ｗ，循環(huán)腫瘤細(xì)胞具有、很重要的臨床意

5、義，對(duì)早期診斷、預(yù)后判斷療效檢測(cè)和班向藥物的開發(fā)等提供理論基礎(chǔ)。在全血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞與血細(xì)胞數(shù)相比極少，對(duì)其進(jìn)行分離、檢測(cè)和純化一仍具有定的挑戰(zhàn)性、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞密度和腫。目前主要依據(jù)腫瘤細(xì)胞的大小瘤細(xì)胞獨(dú)特的生物學(xué)特性對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行分離，包括過濾法、密度梯度離也法、細(xì)胞表面電荷法和免疫磁珠法等。對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)主要從細(xì)胞計(jì)數(shù)和一核酸表達(dá)分析兩個(gè)方面進(jìn)行。研究者直致力于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的富集、檢測(cè)和純化技術(shù)的研究，希望能夠找到高效捕獲腫瘤細(xì)胞的方法并將其應(yīng)用于臨床檢測(cè)。一ＣＴＣ微流控芯片是近幾年飛速發(fā)展的種對(duì)ｓ進(jìn)斤快速檢測(cè)

6、和操控的技術(shù)。它具有可控的單元集成模式和微尺度結(jié)構(gòu)一，可實(shí)現(xiàn)樣品處理、捕獲和檢測(cè)體化，降低試劑和樣品量的消耗，獲，能實(shí)現(xiàn)快速、高效、高通量的分析得更多有關(guān)ＣＴＣｓ的信息。ＭＵＣ一１是類高分子糖蛋白，正常細(xì)胞中低表達(dá)，在癌細(xì)胞和癌組織中高表達(dá)并Ｗ疇形糖基化和糖基化不完全兩種形態(tài)存在，從而使抗原分布在癌細(xì)胞表面，可被特異性抗體識(shí)別。ＭＵＣ１與腺癌特別是乳腺癌的癌細(xì)胞惡變、轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)密切相關(guān)，其表達(dá)與乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移也具有相關(guān)性。Ｉ－ＭＢ－２３微流控若片高效捕獲亂腺癌細(xì)胞ＭＤＡ１及再培養(yǎng)研究本研究利用微流控芯片作為載體

7、，通過對(duì)巧片基底表面進(jìn)斤ＭＵＣ１抗體修俯利用抗原與抗體相結(jié)合的方法－ＭＢ－，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人乳腺腫瘤細(xì)胞ＭＤＡ２３１的特異性捕獲和研究。乳腺腫瘤細(xì)胞捕獲的條件和環(huán)境嚴(yán)重影響了癌細(xì)胞捕獲效率，因此篩選和優(yōu)化捕獲條件對(duì)于提高細(xì)胞捕獲率很有必要。實(shí)驗(yàn)中從微流控基底表面的粗糖度、微流控孔道的花紋、抗體膊育時(shí)間、細(xì)胞樣品注入流速、細(xì)胞注入巧片后在通道內(nèi)停滯的時(shí)間等方面進(jìn)行捕獲條件優(yōu)化，結(jié)果獲得了較高的細(xì)胞捕一獲率。捕獲后的乳腺癌細(xì)胞經(jīng)過分離和再培養(yǎng)，進(jìn)步利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒矗崳姂?yīng)（ＲＴ－ＰＣＲ）和實(shí)時(shí)巧光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Ｑ－ＰＣＲ）分別分析芯片捕

8、獲是否影響乳腺癌細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)水平