斜紋夜蛾性信息素合成激活肽(pban)的基因克隆及功能分析

斜紋夜蛾性信息素合成激活肽(pban)的基因克隆及功能分析

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1、分類號密級公開編號磧士研究嗲像儉式題目斜紋夜餓性龜素合成激的基因憲隆及功能分析、學院(所、中心)生命科學學院專業(yè)名稱動物學研究生姓名陸沁學號導師姓名徐進副研究員導師姓名葉輝職稱教授年月論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)本論文是作者在導師指導下取得的研宄成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外,論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,不存在剽竊或抄襲行為。與作者一同工作的同‘志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意?,F(xiàn)就論文的使用對云南大學授權(quán)如下:學校有權(quán)保留本論文(含電子版),也可以采用影印、縮印或其他復制手段

2、保存論文;學校有權(quán)公布論文的全部或部分內(nèi)容,可以將論文用于查閱或借閱服務;學校有權(quán)向有關(guān)機構(gòu)送交學位論文用于學術(shù)規(guī)范審查、社會監(jiān)督或評獎;學校有權(quán)將學位論文的全部或部分內(nèi)容錄入有關(guān)數(shù)據(jù)庫用于檢索服務。內(nèi)部或保密的論文在解密后應遵循此規(guī)定)研究生簽名:導師簽名葉日期:!摘要斜紋夜蛾性信息素合成激活肽的基因克隆及功能分析摘要斜紋夜蛾又名蓮紋夜蛾,斜紋夜盜蛾,俗稱花蟲、黑頭蟲等,是分布于全世界的農(nóng)作物主要害蟲之一。斜紋夜蛾寄主范圍廣,食性雜,具暴食性,世代重疊且抗藥性強,在適宜生境下很容易爆發(fā)成災,嚴重時幼蟲可將寄主葉片、花全部啃食,造

3、成重大經(jīng)濟損失。利用性信息素誘捕和干擾交配己經(jīng)在害蟲的測報和防控中廣泛應用,相應的昆蟲合成與釋放性信息素的內(nèi)在機制也成為該領域研究的重點。蛾類昆蟲性信息素合成主要由性信息素合成激活肽(及其受體調(diào)控。由雌蛾咽下神經(jīng)節(jié)合成并通過血淋巴到達性信息素腺(并與其細胞膜上的受體結(jié)合,通過信號轉(zhuǎn)導激活下游性信息素合成途徑。由基因編碼,但該基因除了編碼,還編碼滯育激素及另外三種功能不明確的多肽(、。本研究通過簡并引物和擴增,首次獲得了斜紋夜蛾基因的全長序列該序列全長含有一個編碼個氨基酸的其’為、’為。通過神經(jīng)肽切割位點和和保守序列分析,發(fā)現(xiàn)這個含

4、有個氨基酸的前體蛋白在六個位點被切割并得到五個可能的神經(jīng)肽:,以及、。通過分析還發(fā)現(xiàn)該前體蛋白端還含有一個個氨基酸的信號肽。同源性分析表明斜紋夜蛾的蛋白序列與其它鱗翅目昆蟲同源性較高(,但與鞘翅目、膜翅目及雙翅目(等昆蟲的同源性較低(?;谛奔y夜蛾及其它種昆蟲的所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹與昆蟲分類學完全吻合,云南大學碩士學位論文斜紋夜蛾和其它鱗翅目昆蟲以的可信度構(gòu)成了一個單系。實時熒光定量分析表明,基因在幼蟲及蛹期表達量表現(xiàn)出一致性,均是隨著齡期的增加表達量逐漸降低,到了老熟幼蟲及老熟蛹期,幾乎不表達,而在一齡蛹期表達量為一生最高。到了成

5、蟲期,的表達量受光周期及齡期影響較大,為白天大于黑夜,但無論白天還是黑夜,表達量都維持在一個比較穩(wěn)定的水平。內(nèi)種性信息素,丨和含量的變化也與光周期及齡期有關(guān),總體表現(xiàn)為黑夜大于白天,而剛羽化的雌蟲性信息素含量最高。無論白天黑夜,羽化后天內(nèi)的成蟲性信息素含量均維持在一定水平。通過注射人工合成的進行千擾并結(jié)合熒光定量分析,結(jié)果表明每只雌蟲注射〗咫的濃度為問爾,即每只注射顯著抑制了斜紋夜蛾基因的表達(相對表達量下調(diào)了左右),相應地干擾后內(nèi)種性信息素的含量也顯著下降。進一步地,通過給雌蟲注射人工合成的,也顯著地提高了雌蛾內(nèi)種性信息素的含量

6、。交配對雌性斜紋夜蛾性信息素含量及表達量均有影響。雌蛾交配后,表達量降低,但性信息素含量反而升高。本研宄首次克隆了斜紋夜蛾基因的全長序列,并進一步通過表達、、蛋白注射及性信息素合成量分析表明是斜紋夜蛾性信息素合成的關(guān)鍵調(diào)控分子。本研究為將來完全闡明斜紋夜蛾性信息素合成與釋放的內(nèi)在機制奠定了基礎并為基于性信息素及的害蟲防治新途徑的探索提供思路和靶基因。關(guān)鍵詞:斜紋夜蛾;性信息素合成;;干擾;AbstractIdentificationandFunctionalAnalysisofthePheromoneBiosynthesisAct

7、ivatingNeuropeptide(PBAN)intheCommonCutwormMothSpodopteralitura(Lepidoptera;Noctuidae)AbstractSpodopteralituraisoneofthemostdestructiveinsectpestsofmanyagriculturalcropsandnotoriousfordevelopinginsecticideresistance.Developingenvironmentalfriendlycontrolmethodssuchasn

8、ovelpheromoneandRNAirelatedcontrolstrategiesIsimperativetocontrolthispest.Sexpheromonebasedmasstrappingandmatingdisruptionha

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