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《用于發(fā)酵黃芪的益生菌株fgm誘變選育及突變株特性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、密級：論文編號：中囯農(nóng)北科學(xué)院學(xué)位論文用于發(fā)酵黃苗的益生菌株FGM誘變選育及突變株特性研究ResearchonMutagenesisandSelectiveBreedingoftheProbioticsStrainFGMandtheCharacteristicsofMutantStrainforFermentingmembranaceus碩士研究生：陳婕指導(dǎo)教師：李建喜申請學(xué)位類別：獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱：獸醫(yī)培養(yǎng)單位：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院蘭州畜牧與獸藥研究所2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationR
2、esearchonMutagenesisandSelectiveBreedingoftheProbioticsStrainFGMandtheCharacteristicsofMutantStrainforFermentingAstragalusmembranaceusM.S.Candidate：JieChenSupervisor：Prof.JianxiLiDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinaryMay2015III摘要黃芪多糖具有多種重要的藥理作用，非解乳糖鏈球菌FGM是分離自雞盲腸，能夠發(fā)酵黃芪，提高多糖提取率的益生菌。為了進一步提升菌
3、株FGM的發(fā)酵性能，揭示黃芪經(jīng)發(fā)酵后多糖含量提高的潛在機制，本研究采用紫外線（UV）和亞硝基胍（NTG）對FGM進行誘變選育，用誘變菌株發(fā)酵黃芪，通過水提醇沉法提取發(fā)酵產(chǎn)物中的多糖，苯酚硫酸法測定多糖含量，篩選得到了兩株高多糖得率菌株，分別從穩(wěn)定性、安全性、生化特征、發(fā)酵酶的相關(guān)基因克隆和表達等方面進行評價和研究，并對菌株進行全基因組測序與比較基因組學(xué)分析。具體研究結(jié)果如下：（1）采用UV、NTG和UV-NTG復(fù)合誘變的方法，對FGM株進行誘變選育。結(jié)果顯示，UV照射10～120s所得的菌株發(fā)酵黃芪后產(chǎn)物中多糖含量均呈升高趨勢，NTG處理所得菌株發(fā)酵黃芪后產(chǎn)物中多糖含量變化無規(guī)律性。UV誘變
4、的最佳條件是在紫外燈下處理90s，最終發(fā)酵產(chǎn)物中多糖含量為235.51mg/g，較出發(fā)菌株提高了58.13%，將該菌株命名為U90；UV-NTG復(fù)合誘變的最佳條件是先用紫外燈照射10s，再用1.0g/L的NTG處理10min，最終其發(fā)酵產(chǎn)物中多糖含量可達293.39mg/g，較出發(fā)菌株提高了94.99%，將該菌株命名為UN10-1。（2）將U90和UN10-1連續(xù)傳代10次，每代均分析發(fā)酵黃芪后多糖的提取率，評價遺傳穩(wěn)定性。U90連續(xù)傳6代，取每代菌株發(fā)酵黃芪后產(chǎn)物中多糖含量穩(wěn)定在233.6±1.66mg/g，第4代多糖含量最高，為235.85±0.78mg/g，從7代開始多糖含量隨傳代次數(shù)
5、增加而減少。菌株UN10-1產(chǎn)糖量比較穩(wěn)定，含量為292.06±0.89mg/g。生化鑒定結(jié)果提示，UN10-1連續(xù)傳代10次產(chǎn)糖量仍趨于穩(wěn)定的原因可能與其能利用核糖、乳糖、阿拉伯糖有關(guān)。（3）分別用UN10-1菌懸液和48h黃芪發(fā)酵液灌胃小鼠，0.5mL/次，1次/d，連續(xù)灌胃3d，觀察7d，灌服等量生理鹽水作對照。觀察記錄小鼠日常行為及體重，測定血液生理指標，觀察主要臟器（心、肝、脾、肺、腎、胸腺、小腸）及組織形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果顯示，UN10-1對小鼠生長發(fā)育及組織形態(tài)學(xué)無不良影響，提示該菌株安全無毒。（4）分析了UN10-1發(fā)酵產(chǎn)糖相關(guān)基因galE、dexB、aga2、ldh、recA。
6、成功擴增出recA和aga2基因，以recA為內(nèi)參基因分析了aga2基因在黃芪發(fā)酵過程中的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，aga2基因在發(fā)酵24h內(nèi)表達呈上升趨勢，24h時該基因表達量是初始發(fā)酵的9.54倍；24h～60h該基因表達呈下降趨勢，60h～72h又略有升高。（5）比較基因組學(xué)分析結(jié)果顯示，在KEGG數(shù)據(jù)庫中注釋得到FGM和UN10-1位于糖代謝通路上的基因分別有125個和124個，SNP檢測發(fā)現(xiàn)UN10-1有1個無義突變位點和26個位于基因區(qū)的非同義突變位點。綜上所述，采用UV和NTG復(fù)合誘變益生菌FGM可獲得發(fā)酵黃芪提取多糖性能更優(yōu)的菌株UN10-1，該菌株對小鼠無毒副作用；誘變菌株UN10-
7、1與出發(fā)菌株FGM相比，發(fā)酵過程中糖代謝酶相關(guān)基因aga2在發(fā)酵過程中的表達量有升高趨勢；比較基因組學(xué)分析結(jié)果表明UN10-1有基因突變。關(guān)鍵詞：益生菌株FGM，誘變選育，特性，基因表達，全基因組測序IIIAbstractAstragaluspolysaccharideshasattractedmuchinterestbecauseofitsmultipleimportantpharmacologicalac
