羊痘病毒實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測(cè)方法的建立

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1、．‘－此．１．Ｖ；．＾－．＇－－．．．．Ｖ，．聲．?dāng)U．．、分類號(hào)挑５２．６５＋４學(xué)校代碼１０１２９ＵＤＣ６％．０９學(xué)號(hào)２０１３２１６０５１一，叩書寺；ｔ嗦攀碩±學(xué)位論文羊痘病毒實(shí)時(shí)焚光定量ＰＣＲ檢測(cè)方法的建立ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｅａｌｔｉｍｅＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＱＰＣ民ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｆＣ幻ｐｒ扣＊＇＇Ｖ－＇．．．＇申請(qǐng)人；鹿方圓；Ｖ?wèi)簦墝W(xué)位名稱Ｗ；獸醫(yī)碩±＂ｃ．．領(lǐng)域：＇Ａ＂＇二一、＇二

2、。指導(dǎo)教師：：張七斤教授二＇－－．－‘．＇■＇．＇ｙ：；；論文提交曰期二〇—五年六月：Ａ．－－－、－？：巧．＇．ｖ／？，／．，Ｉ／．ｒ．、．Ｔ〇．■？．巧．巧蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究王作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加Ｌ乂標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包括其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得我校或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用一過的材料，與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了

3、明確的說明并表示謝意。之處一申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)，本人承捏切相關(guān)責(zé)任。’論文作者簽名：日期：ＷＵ／徊固＿＿內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知巧產(chǎn)權(quán)單位屬內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文王作成果時(shí)署名單位為巧蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電＾！子文檔，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？蓙V公布學(xué)位論文的全部或部分巧容（保密內(nèi)容除外），

4、采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名Ｉ；關(guān)嗎指導(dǎo)教師簽名：終研日期．：感／／摘要本研究參考ＧｅｎＢａｎｋ中山羊痘病毒基因組序列（ＡＹ０７７８３６）和綿羊痘病毒基因組序列（ＡＹ０７７８３２），針對(duì)Ａ２９Ｌ基因的核昔酸序列，設(shè)計(jì)１對(duì)特異性引物和兩條ＴａｑＭａｎ探針，同時(shí)制備重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。通過退火溫度、引物濃度和探針濃度的篩選及優(yōu)化，將標(biāo)準(zhǔn)陽性質(zhì)粒１０倍倍比稀釋后，作實(shí)時(shí)萊光定量ＰＣ民標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立了檢測(cè)羊痘病毒的實(shí)時(shí)蒙光定量ＰＣＲ方法，．對(duì)所建立的實(shí)時(shí)蒙光定量ＰＣＲ方、法的特異性靈敏性和重復(fù)性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并用此方法對(duì)幅床樣品進(jìn)行了

5、檢測(cè)。’：Ｃ民的５８．４Ｃ結(jié)果顯示建立的實(shí)時(shí)萊光定量Ｐ反應(yīng)條件為退火濕度，引物濃度４００ｎｍｏｌ／Ｌ，探針濃度２００ｎｍｏｌ／Ｌ。該診斷方法與其它四種病毒不發(fā)生交叉反應(yīng)，并且山羊痘病毒和綿羊痘病毒之間也不發(fā)生交叉反應(yīng)。該方法的重復(fù)性試驗(yàn)變異系２％４７０ｆ數(shù)均低于，并且雙重實(shí)時(shí)巧光定量ＰＣＲ最低濃度檢測(cè)限分別為ｇ和４４０毎。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)陽性模板進(jìn)行定量檢測(cè)，生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)分別為０．９９５和化９９７。結(jié)果表明所建立的方法具有良好的特異性、靈敏性、穩(wěn)定性，可＾＾Ａ對(duì)ＧＴＰＶ和ＳＰＰＶ進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測(cè)。對(duì)１９份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)，ＧＴＰＶ陽性有１４份，ＳＰＰＶ

6、陽性４份ＧＴＰＶ和ＳＰＰＶ混合感。有，染有１份關(guān)鍵詞；實(shí)時(shí)榮光定量ＰＣＲ；山羊痘病毒；綿羊痘病毒化ｅ－Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆ民ｅａｌｔｉｍｅＦｈｉｏｒｅｓｃｅｎｃｅｕａｎｉａｉｖｅＱｔｔｔＰＣ民ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅ化ｏｄｏｆＣｏｗｐｏｒｖ如Ｍ五／ｊＡｂｓｔｒａｃｔＯｎｅａｉｒｏｆｅｃｉｆｉｃｒｉｍｅｒａｎｄｔｗｏＴａＭａｎｒｏｂ巧ｗｅＫｄｅｓｉｎｅｄａｎｄｓｔｈｅｓｉｚｅｄｐ巧ｐｑｐｇｙｎａｃｃｏｒｄｉｎｇ化ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＡ２９Ｌｇｅｎｅｏｆｇｏａｔｐ

7、ｏｘｖｉｍｓ（ＡＹ０７７８３６）ａｎｄｓｈｅｅｐｐｏｘｖｉｒａｓ（ＡＹ０７７８３２）ｉｎＧｅｎＢａｎｋ．ＡｎｄＳｔａｎｄａｒｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．ｅｒｅａ？Ｔｈｌｔｉｍｅ。１１〇１的ｃｅｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＰＧＲｍｅｔｈｏｄｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇＱｊｐｎｏｘｗｙｗｗａｓｉｐｅｓｔａｂｌｉｓｈｂｙ巧ｌｅｃｔｉｎｇａｎｄｏｐｔｉｍｉｚ虹ｇａｎｎｅａｌｉ