銀花泌炎靈片抗炎作用及其機(jī)制研究

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1、銀花泌炎靈片抗炎作用及其機(jī)制研究ResearchontheAnti-inflammatoryEffectsandPreliminaryMechanismoftheYinhuaMiyanlingTablet作者姓名：賽景影專業(yè)名稱：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：王放教授學(xué)位類別：理學(xué)碩士答辯日期：2015年5月20日中文摘要銀花泌炎靈片抗炎作用及其機(jī)制研究銀花泌炎靈片為采用現(xiàn)代工藝精制而成的中成藥制劑，其組方由金銀花、半枝蓮、萹蓄等十味中藥材組成，是治療泌尿系統(tǒng)感染的臨床常用藥物，現(xiàn)已成為泌尿系統(tǒng)感染治療的首選中藥之一。以往研究認(rèn)為該藥具

2、有抗菌、清熱解毒、通淋利尿、補(bǔ)腎固本，活血化瘀、提高機(jī)體免疫力等作用。本研究組應(yīng)用現(xiàn)代藥理學(xué)研究技術(shù)發(fā)現(xiàn)銀花泌炎靈片具有抑制大腸埃希菌生長的作用，對(duì)大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922和產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的MBC50-90分別為100mg/mL和150-250mg/mL,但其是否具有抗炎作用及抗炎機(jī)制尚不清楚。本研究從細(xì)胞學(xué)水平證明銀花泌炎靈片具有抗炎作用，并應(yīng)用炎癥因子芯片初步探討了其抗炎機(jī)制，為了該藥的進(jìn)一步臨床應(yīng)用及推廣提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法：1.藥物抗炎活性研究：采用Ficoll密度梯度離心法分離健康人外周

3、血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheralbloodmononuclearcell,PBMC），以無菌的脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）刺激PBMC，建立炎癥模型。實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組（給予無菌細(xì)胞培養(yǎng)液），模型組（LPS炎癥模型組），藥物治療組（造模后給藥組）。造模后，以正常對(duì)照組作為對(duì)照，應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽（Fourmethylthiazolyltetrazoliumsalt,MTT）法測定藥物治療組的細(xì)胞毒性。為確認(rèn)藥物治療組細(xì)胞在藥物作用前后的數(shù)量未發(fā)生明顯變化，先以臺(tái)盼藍(lán)法計(jì)數(shù)藥物作用前及作用后活細(xì)

4、胞率，再以（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)液中炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IIL-6、IL-10、MCP-1的蛋白表達(dá)水平。2.藥物抗炎機(jī)制研究：以2TMPAHS-097ZA-2RTProfilerPCRArrayHumaninflammasomes炎癥因子芯片法高通量篩選藥物的炎癥因子作用靶點(diǎn)及相關(guān)通路，應(yīng)用MatLab聚類分析技術(shù)和KEGG數(shù)據(jù)庫等方法對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：銀花泌炎靈片對(duì)PBMC的半數(shù)抑制濃度（halfmaximalinhib

5、itoryconcentration，IC50）為4.05mg/mL；藥物作用前后各組細(xì)胞存活率均>95%；藥物治療組和模型組相比較，TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和MCP-1顯著降低（P＜0.01）。HumaninflammasomesPCRArray芯片結(jié)果顯示：藥物治療組與模型組相比較，15個(gè)基因出現(xiàn)差異表達(dá)（表達(dá)倍數(shù)>2.0）；Pathway分析結(jié)果顯示：出現(xiàn)差異表達(dá)的15個(gè)基因主要關(guān)聯(lián)在NOD樣受體和Toll樣受體（NOD-likereceptor和Toll-likereceptor）pathway上

6、。結(jié)論：銀花泌炎靈通過降低IL-1β和IL-18等炎癥因子的分泌而發(fā)揮抗炎作用，其機(jī)制主要是該藥物影響了NOD樣受體和Toll樣受體Pathway中的炎癥相關(guān)基因NLRP3、NLRP1以及caspase-1等的表達(dá),從而抑制了下游的炎癥反應(yīng)。關(guān)鍵詞：銀花泌炎靈片；炎癥反應(yīng)；固有免疫；PBMC；炎癥因子；NLRP3IIAbstractResearchontheAnti-inflammatoryEffectsandPreliminaryMechanismoftheYinhuamiyanlingTabletYinhuanmiyan

7、lingTabletsisoneofproprietaryChinesemedicinewhichcomposedbyhoneysuckle,Scutellariabarbata,knotgrassandotheringredients,istheclinicalcommonlyuseddrugsforthetreatmentofurinarysysteminfections,ithasbecomeoneofthepreferredChinesemedicineforthetreatmentofurinarytractinf

8、ections.Previousstudiessuggestthatthemedicinehasthefunctionsofanti-bacteria,detoxification,leachingdiuresis,kidneyfoundation,andbloodcirculation,