細(xì)胞因子風(fēng)暴在流感病毒誘導(dǎo)的急性肺損傷中作用機(jī)制的研究

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1、＾京搗和皆凈悅中糾《狀博女研究生學(xué)位論文Ｗ北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院學(xué)校代碼１００；２３學(xué)號(hào)；Ｂ２０１２００５０１９博±學(xué)位論文細(xì)胞因子風(fēng)暴在流感病毒誘導(dǎo)的急性肺損傷中作用機(jī)制的研究所院；基礎(chǔ)學(xué)院姓名：王偉指導(dǎo)教師：蔣澄宇教授學(xué)科專業(yè)；生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向；呼吸系統(tǒng)疾病的致病機(jī)理完成日期；２０１５年４月１５日北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基巧學(xué)院博±學(xué)位論文目錄ＳｇＳ５表ｅ錄６英文縮略語表７一－１第部分ＩＰ１０

2、在甲型Ｈ１Ｎ流感病毒誘導(dǎo)的急性肺損傷中致病機(jī)理的研究１０帖摘要１１Ａｂｓｔｒａｃｔ１２引胃１３—１６＞實(shí)驗(yàn)材輯與方法一第節(jié)甲型Ｈ１６１Ｎ１流感病毒的培養(yǎng)、收集和濃縮１１．實(shí)驗(yàn)材料１６１丄１病毒１６１１６．１．２動(dòng)物１丄３實(shí)驗(yàn)儀器１６１．１．４實(shí)驗(yàn)試劑１６１．２１６施１．－２１活歴檢査１６１．１２．２雞胚尿囊腔接種７１．２．３流感病毒的收獲１７１．２．４雞胚尿囊液中流感病毒的粗離１７１．２．５超速離也

3、法濃縮流感病毒１７第二節(jié)甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒血凝單位及５０％培養(yǎng)組織感染劑量（ＴＣＩＤ５０）的測(cè)定１８２．１實(shí)驗(yàn)材料１８２丄１病毒１８２．１．２ＭＢ１８２丄３實(shí)驗(yàn)儀器１８２丄４實(shí)驗(yàn)試劑１８２１．２方法８〇２．２．１／〇雞紅細(xì)胞懸液制備１１８２．ＣＫ細(xì)胞的培養(yǎng)１．２２ＭＤ９２．２．３流感病毒的血凝單位測(cè)定１９２．２４流０２．感病毒ＴＣＩＤ５的測(cè)定０第三節(jié)純合知Ｗ基因敲除小鼠的鑒定２０３．１實(shí)驗(yàn)材料２０３丄１實(shí)驗(yàn)動(dòng)物２０

4、３丄２實(shí)驗(yàn)儀器２１３丄３實(shí)驗(yàn)試劑２１３丄４主要溶液配方２１３丄５ＰＣＲ引物２２．２３方法２２．．Ａ３２１小鼠ＤＮ搗?。墸玻玻崳姡常玻保牐校茫覕U(kuò)増目的片段２３第四節(jié)毎幕因敲除小鼠感染甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒后的相關(guān)檢測(cè)２４１北京協(xié)和屋學(xué)院基拙學(xué)院博±學(xué)位論文４．１實(shí)驗(yàn)材料２４４．１．１病毒２４４丄２細(xì)胞２４４丄３實(shí)驗(yàn)動(dòng)物２４４丄４實(shí)驗(yàn)儀器２４４丄５實(shí)驗(yàn)試劑２５４丄６主要溶液配方２５４１．４ＰＣＲ引；２．巧光

5、定量物６４．２方法２６４１．２．１檢測(cè)ＢＪ５０株感染后小鼠的體重變化和死亡率２６４．２．２檢測(cè)ＢＪ５０１株感染后小鼠肺組織的病理變化２６１２７４．２．３檢測(cè)ＢＪ５０株感染后小鼠肺組織的濕干比４１．２．４檢測(cè)ＢＪ５０株感染后小鼠肺組織中的病毒滴度２８－８４．２．５ＲＴＰＣＲ檢測(cè)ＢＪ５０１株感染后小鼠肺組織中的病毒載量２４．２．５．１小鼠肺組織樣品的準(zhǔn)備２８．．．４２５２總ＲＮＡ提取２９一．２．４．５３ｃＤＮＡ第鏈合成３０４．４３０．２．５巧

6、光定量ＰＣＲ檢測(cè)－第五節(jié)ＩＰ１０在甲型Ｈ．．３１１Ｎ１流感病毒感染誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中相關(guān)信號(hào)通路的檢測(cè)５３１．１實(shí)驗(yàn)材料５丄１病毒３１５丄２實(shí)驗(yàn)動(dòng)物３２５丄３實(shí)驗(yàn)儀器３２５丄４實(shí)驗(yàn)試劑３２５．１．５主要溶液祀方３２５丄６使用的主要抗體３４５．２方＆３５５．２．１巧姑基因敲除小鼠感染甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒后的相關(guān)檢測(cè)３５．１５２丄１檢測(cè)ＢＪ５０株感染后小鼠的體重變化和死亡率３５５．２丄２檢測(cè)ＢＪ５０１株感染巧小鼠肺組織的病理變化３５５．

7、２丄３檢測(cè)ＢＪ５０１株感染后小鼠肺組織的濕干比３６ＷｅＩ巧５．２．２ｓｔｅｒｎｏＢ０ｂｌｔ檢巧ＪＪ５１株感染巧小鼠肺組織中相關(guān)蛋Ａ表達(dá)水平的變化５．２．２．Ｉ小鼠肺組織樣品的制備ｙｊ．．２．ＢＣＡ５２２蛋白質(zhì)巧量試劑盆檢測(cè)蛋白濃度巧５．２＇２．３Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測(cè)３８．２．ｅｓｅｒｎ５．２４Ｗｔｂｌｏｔ結(jié)果定量分析巧第六節(jié)化１０單克隆抗體治療甲型Ｈ１Ｎ１流感病毒感染小鼠的相關(guān)檢測(cè)巧６．１《驗(yàn)材料４０６丄１病毒４０６丄２實(shí)驗(yàn)動(dòng)物４０

8、６丄３實(shí)驗(yàn)儀器４０６丄４實(shí)驗(yàn)試劑４０６．２方＆４０－．．１４０６２檢測(cè)ＩＰ１０單克降抗俾治療ＢＪ５０１株感染小鼠的死ｔ華２北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院博±學(xué)位論文－６．２．２檢測(cè)ＩＰ０１單克隆抗體治療ＢＪ５０１株感染小鼠的肺組織的病理變化４１－６．２．３檢測(cè)ＩＰ１０單克隆抗體治療ＢＪ５０１株感染小鼠的肺組織的濕千比４２６２４檢測(cè)－００．．．ＩＰ１單克隆抗體治療ＢＪ５