白介素33在百草枯誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷中的作用機(jī)制研究.pdf

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1、安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Aug；49(8)。1027·◇基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究◇白介素33在百草枯誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷中的作用機(jī)制研究劉晨風(fēng)，吳小紅，曾揚(yáng)，高同同，于虹，郭彥，孫世惠，周育森摘要目的探討白介素33(IL一33)在百草枯(PQ)染毒小functionsyndrome，MODS)而導(dǎo)致死亡?。由于ALI鼠急性肺損傷(ALI)模型中的表達(dá)及作用。方法25只的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚不清楚。其中由化學(xué)SPF級(jí)雌性BALB／c小鼠平均分為正常對(duì)照組，PQ損傷6、強(qiáng)毒除草劑百草枯(paraquat，PQ)中毒所致的12、

2、24、48h組。腹腔注射PQ(30mg／kg)建立小鼠ALI模型ARDS，已導(dǎo)致數(shù)千人中毒死亡，病死率高達(dá)并于各時(shí)間點(diǎn)處死取材。評(píng)價(jià)肺組織病理變化和炎癥細(xì)胞70％。白介素33(interleukin一33，IL-33)是IL一1浸潤(rùn)；觀察血清白介素1B(IL一1B)、IL-2、IL-6、腫瘤壞死因子家族的新成員，在慢性炎癥、心血管疾病和變態(tài)反應(yīng)(TNF一)和肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)水平變化；RT。性等疾病中發(fā)揮重要作用J。研究顯示IL33PCR、免疫組化和Westernblot分別檢測(cè)組織中IL．33mRNA既能作為促炎因子活化炎癥，加重組織損傷，也可作和蛋白表達(dá)水平變化。

3、分析IL-33與病理?yè)p傷和炎癥指標(biāo)為染色質(zhì)相關(guān)核因子起轉(zhuǎn)錄抑制作用，輔助抑制前關(guān)聯(lián)性以明確IL-33在調(diào)解內(nèi)源性細(xì)胞因子及在Au中的炎癥基因表達(dá)J。但目前鮮有報(bào)道評(píng)價(jià)IL-33在急作用。結(jié)果與正常對(duì)照組相比，PQ損傷后小鼠肺組織彌漫性損傷伴有嚴(yán)重水腫及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，促炎細(xì)胞因子性炎癥中的作用。為此，該實(shí)驗(yàn)使用PQ建立小鼠IL-1B、IL-6、TNF—、MPO明顯升高，抑炎細(xì)胞因子IL-2明顯Au模型，系統(tǒng)研究了IL一33表達(dá)與Au小鼠的病理下調(diào)(P<0．05)；PQ損傷后IL-33在mRNA和蛋白表達(dá)水平和炎癥細(xì)胞因子之間的動(dòng)態(tài)變化關(guān)系，闡述了IL．33均顯著下調(diào)(P<0．

4、05)。關(guān)聯(lián)性分析顯示IL-33與病理?yè)p傷在化學(xué)毒物造成的ALI中的重要調(diào)節(jié)作用。指標(biāo)，IL一1B、IL-6、TNF一、MPO均呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0．05)，1材料與方法與IL-2呈正相關(guān)趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論IL-33在PQ誘導(dǎo)小鼠Au中表達(dá)水平下降，提示可能在調(diào)解內(nèi)源1．1材料與試劑PQ購(gòu)自上海先正達(dá)有限公司；性炎癥因子平衡中發(fā)揮重要作用，可為臨床干預(yù)和治療ALIGoatanti—mouseIL-33抗體購(gòu)自美國(guó)R&D公司；中的新靶點(diǎn)。性粒細(xì)胞抗體購(gòu)自美國(guó)SantaCruz公司；Rabbitanti—關(guān)鍵詞白介素33；百草枯；急性肺損傷；炎癥GAPDH抗體、Rabb

5、itanti—goatIgG(HRP標(biāo)記)和中圖分類(lèi)號(hào)S482．4；R363．1；R392．7AntirabbitIgG(HRP標(biāo)記)均購(gòu)自美國(guó)CellSigna—文獻(xiàn)標(biāo)志碼A文章編號(hào)1000—1492(2014)08—1027—06ling公司；IL-1B、IL-2、IL-6和腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor一，TNF—)ELISA預(yù)包被試劑急性肺損傷(acutelunginjury，Au)發(fā)展到嚴(yán)重盒均購(gòu)自北京達(dá)科為生物技術(shù)有限公司；髓過(guò)氧化階段稱(chēng)為急性呼吸窘迫綜合征(acuterespiratorydis—物酶(myeloperoxidase，MPO)

6、ELISA試劑盒購(gòu)自荷tresssyndrome，ARDS)，最終因形成全身炎癥反應(yīng)綜蘭Hycuhbiotechnology公司；總RNA提取試劑盒購(gòu)合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome，自德國(guó)Qiagen公司；RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA試劑盒購(gòu)自SIRS)和多器官功能障礙綜合征(multipleorgandys．北京全式金生物技術(shù)公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR(SYBRGreen)試劑盒購(gòu)自北京天根生物技術(shù)有限2014—02—25接收基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào)：81371805)；國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究公司；蛋白酶抑制劑混合物購(gòu)自北京普利萊生物技

7、發(fā)展計(jì)劃(973)(編號(hào)：2012CB518905)術(shù)有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，由國(guó)藥(北作者單位：。安徽醫(yī)科大學(xué)北京微生物流行病研究所，合肥230032京)化工集團(tuán)提供。北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全國(guó)家重點(diǎn)1．2動(dòng)物模型建立及分組25只SPF級(jí)雌性實(shí)驗(yàn)室，北京100071BALB／c小鼠，6～8周齡，體重(20±1)g，購(gòu)自軍事作者簡(jiǎn)介：劉晨風(fēng)，男，碩士研究生；孫世惠，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E—mail：sail—醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。小鼠隨機(jī)平均分為5s