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《重組質(zhì)粒pchil-18-mage轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞疫苗體外殺傷肝癌細(xì)胞的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、重組質(zhì)粒pchIL-18-MAGE轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞疫苗體外殺傷肝癌細(xì)胞的研究StudyoftransfectdendriticcellvaccineofrecombinantplasmidpchIL-18-MAGEinlivercancercellinvitro作者姓名：刁斌斌專業(yè)名稱：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：楊廣民教授學(xué)位類別：醫(yī)學(xué)碩士答辯日期：2015年5月28日中文摘要重組質(zhì)粒pchIL-18-MAGE轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞疫苗體外殺傷肝癌細(xì)胞的研究目的：肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，采用手術(shù)、化療及放療等傳統(tǒng)的治療方法盡管顯示一定的治療效果，但仍
2、存在預(yù)后較差，易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，生存率較低的問題。樹突狀細(xì)胞是眾所周知的唯一能激活初始型T淋巴細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞，在腫瘤生物治療中起到了重要作用,因此被廣泛應(yīng)用制備各種腫瘤疫苗。MAGE-1是MAGE家族成員之一，MAGE-1在正常組織中不表達(dá)（除睪丸和胎盤外），而在黑色素瘤和其它多種惡性腫瘤中均有不同程度表達(dá)，尤其在肝癌中高表達(dá)；IL-18是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，能夠促進(jìn)NK細(xì)胞的增殖和活化，誘導(dǎo)NK細(xì)胞分泌IFN-γ,可通過對(duì)IFN-γ和GM-CSF的誘導(dǎo)作用，促進(jìn)MHCⅠ類分子的表達(dá)。因此IL-18可作為免疫佐劑增強(qiáng)疫苗的免疫
3、效果。本實(shí)驗(yàn)研究構(gòu)建腫瘤相關(guān)抗原基因MAGE-1和細(xì)胞因子IL-18的重組質(zhì)粒pcIL-18、pcMAGE-1和其共表達(dá)質(zhì)粒pchIL-18-MAGE，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DC中制備DC疫苗，以期促進(jìn)NK細(xì)胞的增殖與活化，非特異性的殺傷腫瘤細(xì)胞；促進(jìn)DC的成熟，有效的將抗原提呈給T細(xì)胞,更大地激發(fā)特異性的抗腫瘤免疫反應(yīng)，靶向性殺傷腫瘤細(xì)胞。方法：構(gòu)建共表達(dá)質(zhì)粒pchIL-18-MAGE，體外培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞，將以上重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞。RT-PCR和Westernblot驗(yàn)證基因在DC中的表達(dá)。用I流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后DC細(xì)胞表型。經(jīng)過轉(zhuǎn)染DC刺激
4、的淋巴細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，未轉(zhuǎn)染DC刺激淋巴細(xì)胞和單純淋巴細(xì)胞為對(duì)照，檢測(cè)靶細(xì)胞體外殺傷作用。ELISA法檢測(cè)INF-γ分泌。結(jié)果：培養(yǎng)后，經(jīng)顯微鏡和電鏡觀察，可見懸浮樣生長(zhǎng)的細(xì)胞呈樹突樣；PT-PCR和Westernblot鑒定，可見IL-18和MAGE-1基因在DC細(xì)胞中的表達(dá)；轉(zhuǎn)染前、后DC細(xì)胞表面標(biāo)志差異明顯；轉(zhuǎn)染DC與未轉(zhuǎn)染DC均具有很強(qiáng)的刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力；各轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組比較，無(wú)論淋巴細(xì)胞增殖及IFN-γ產(chǎn)生能力均有顯著性差異；pchIL-18-MAGE轉(zhuǎn)染后DC細(xì)胞高表達(dá)DC83、CD1a、CD86、CD80、HLA-
5、DR等抗原，表現(xiàn)為成熟DC表型特征。共表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的DC細(xì)胞誘導(dǎo)的CTL對(duì)肝癌細(xì)胞殺傷作用最強(qiáng)。結(jié)論：pchIL-18-MAGE轉(zhuǎn)染DC細(xì)胞對(duì)MAGE-1+肝癌細(xì)胞殺傷作用明顯。關(guān)鍵詞：疫苗，肝癌，樹突狀細(xì)胞，MAGE-1，IL-18IIABSTRACTStudyoftransfectdendriticcellvaccineofrecombinantplasmidpchIL-18-MAGEinlivercancercellinvitroObjective:Toobservelethaleffectonlivercancercellsbyt
6、heDCstransfectedwithrecombinantplasmidpchIL-18-MAGE.Livercancerisoneofthemostprevalentmalignantdiseasesworldwide.Manylocoregionaltherapeuticapproaches,includingsurgicalresection,radiofrequencyablation(RFA),percutaneousethanolinjection(PEI),andtranscatheterhepaticarterialc
7、hemoembolization(TACE)havebeenappliedinthesearchforcurativetreatmentsforHCC.Unfortunately,thereisstillapoorprognosisandhighrecurrencerateoflivercancer.Dendriticcells(DCs)arethemostpotentantigen-presentingcells.TheimmunefunctionsofDCsinanumberoftumorshavebeenidentifid.DCva
8、ccinationisoneofthenewmodalitiesofimmunotherapyincancerthatposseslessfrequencyofcomplications,mi
