骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個核細(xì)胞自噬水平的研究

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1、分類號：R55學(xué)校代號：10062密級：學(xué)號：2012602666碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個核細(xì)胞自噬水平的研究TITLE:Autophagylevelofbonemarrowmononuclearcellswasabnormalinpatientswithmyelodysplasticsyndromes一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病論文作者：郭利芳指導(dǎo)教師：王化泉主任醫(yī)師天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二O一五年五月I分類號：R55學(xué)校代碼：10062密級：學(xué)號：2012602666學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位□√專業(yè)學(xué)位?

2、學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目：骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個核細(xì)胞自噬水平的研究TITLE：Autophagylevelofbonemarrowmononuclearcellswasabnormalinpatientswithmyelodysplasticsyndromes一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：內(nèi)科學(xué)血液病論文作者：郭利芳指導(dǎo)教師：王化泉主任醫(yī)師導(dǎo)師組成員：邵宗鴻教授劉春燕副主任醫(yī)師江匯涓副主任醫(yī)師天津醫(yī)科大學(xué)研究生二O一五年五月II天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進(jìn)行

3、研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密?在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□√。（請在相對應(yīng)的方框內(nèi)打“√”）學(xué)位論

4、文作者簽名：日期：年月日導(dǎo)師簽名：日期：年月日III天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的研究骨髓增生異常綜合征（MDS）患者骨髓單個核細(xì)胞Beclin1、哺乳動物雷帕霉素靶點（mTOR）、微管相關(guān)蛋白輕鏈3（LC3）水平，初步探討MDS患者骨髓原代細(xì)胞自噬水平的改變。材料與方法38例MDS患者為實驗組（MDS組），26例非惡性貧血患者為對照組。骨髓細(xì)胞鐵染色檢測骨髓細(xì)胞內(nèi)、外鐵含量和環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞；流式細(xì)胞儀檢測骨髓單個核細(xì)胞活性氧（ROS）水平；透射電鏡觀察骨髓單個核細(xì)胞內(nèi)自噬泡數(shù)量；丹（磺）酰戊二胺（MDC）法檢測骨髓單個核細(xì)胞自噬泡水平；免疫熒光法觀察觀察骨髓單個核細(xì)胞中微

5、管相關(guān)蛋白輕鏈3（LC3）蛋白表達(dá)，qPCR法檢測自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3、mTORmRNA表達(dá)，Westernblottiing檢測Beclin1、LC3蛋白的表達(dá)。結(jié)果(1)骨髓細(xì)胞鐵染色發(fā)現(xiàn)MDS患者細(xì)胞外鐵、細(xì)胞內(nèi)鐵和環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞數(shù)量均較對照組增加。（2）流式細(xì)胞術(shù)檢測到MDS組（n=7）患者骨髓單個核細(xì)胞ROS水平（1352.41±667.51）高于對照組ROS水平（n=5，596.46±233.99，P＜0.05）。（3）透射電鏡觀察到MDS患者骨髓細(xì)胞內(nèi)存在雙層膜結(jié)構(gòu)自噬泡，內(nèi)含溶酶體。（4）MDC染色發(fā)現(xiàn)MDS組（n=4）染色陽性（自噬泡）細(xì)胞數(shù)目比例

6、（9.75%±2.63%）顯著高于對照組（n=5，2.90%±0.89%，P＜0.05）。（5）免疫熒光法觀察到MDS組（n=4）LC3陽性細(xì)胞數(shù)目比例（6.13%±1.03%）顯著高于對照組（n=4，1.5%±0.58%，P＜0.05）。（6）qPCR法檢測到低危/中危-1MDS組（n=14）骨髓單個核細(xì)胞Beclin1mRNA表達(dá)水平（3.61±3.02）顯著高于對照組（n=11，1.55±1.03，P＜0.05）；中危-2/高危MDS組（n=8）Beclin1mRNA表達(dá)水平為2.63±2.79，高于對照組，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05；低危/中危-1MDS組（n=10）

7、骨髓單個核細(xì)胞LC3AmRNA水平(6.56±3.97)顯著高于對照組（n=7，1.21±0.95，P＜0.05）；低危/IV天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中危-1MDS組（n=9）骨髓單個核細(xì)胞的自噬負(fù)性調(diào)控基因mTORmRNA水平(0.39±0.37)顯著低于于對照組（n=9，1.50±1.03，P＜0.05）；中危-2/高危MDS組（n=4）mTORmRNA表達(dá)水平為1.73±1.69，高于對照組，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05。(7)Westernblotting發(fā)現(xiàn)Becli