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《雞與鵪鶉屬間雜交種胚胎早期死亡相關(guān)基因的功能研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：密級：學(xué)號：2012108007單位代碼：10759石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文雞與鵪鶉屬間雜交種胚胎早期死亡相關(guān)基因的功能研究學(xué)位申請人翟曼君指導(dǎo)教師趙宗勝教授申請學(xué)位門類級別農(nóng)學(xué)碩士學(xué)科、專業(yè)名稱動物遺傳育種與繁殖研究方向動物遺傳資源利用與分子育種所在學(xué)院動物科技學(xué)院中國·新疆·石河子2015年6月Theresearchofthegenefunctionwhichrelatedtotheembryosearlydeathofchicken-quailhybridsADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInFulf
2、illmentoftheRequirementsFortheDegreeofMasterofAgricultureByZhaiManjun(AnimalGeneticandBreeding)DissertationSupervisor:Prof.ZhaoZong-shengJune,2015Shihezi,xinjiang,China摘要雞和鵪鶉為家禽生產(chǎn)中的常見物種，雞與鵪鶉同種不同屬，其間雜交屬于禽類中的典型屬間遠(yuǎn)緣雜交，是基因功能研究和比較基因組學(xué)的良好資源；而雞與鵪鶉雜交種在孵化過程中大量死亡，已有研究表明雜交種胚胎的死亡與胚胎組織器官發(fā)育不完全和性分化
3、相關(guān)，而在胚胎發(fā)育、性別分化過程中參與的基因和信號通路眾多。本研究對雌、雄雞和雌、雄雜交種數(shù)字基因表達(dá)譜進(jìn)行生物信息學(xué)分析篩選出與胚胎發(fā)育、性別分化相關(guān)基因，構(gòu)建基因過表達(dá)載體和RNA干擾載體，以雞胚細(xì)胞為實驗材料，調(diào)控目標(biāo)基因表達(dá)量，利用實時熒光定量技術(shù)檢測相關(guān)基因表達(dá)變化，探索目標(biāo)基因在表達(dá)異常時對胚胎發(fā)育的影響，為進(jìn)一步研究雌性雜交種胚胎早期死亡的原因奠定基礎(chǔ)。1.對雌雄雞與雌雄雜交種DGE庫通過生物信息學(xué)分析篩選與胚胎發(fā)育、性分化相關(guān)顯著富集的信號通路，如MPKA、Hedgehog、Wnt、Notch等；表達(dá)差異顯著的相關(guān)基因FGF8、DACH、LFNG
4、、SOX1、SOX2、SHH、FOXL2、GPR149、CCND1。2.差異基因FGF8、SHH、FOXL2過表達(dá)載體和干擾載體的構(gòu)建，參照NCBI上公布的原雞FGF8、SHH基因mRNA序列，在基因編碼區(qū)分別設(shè)計擴(kuò)增全長引物，以pEGFP-C2為載體，構(gòu)建雞FGF8和SHH基因過表達(dá)載體；經(jīng)菌液PCR、酶切鑒定和測序驗證，過表達(dá)載體構(gòu)建成功。根據(jù)NCBI上公布的原雞FGF8、SHH和Foxl2基因的mRNA序列，分別依據(jù)基因編碼區(qū)特點設(shè)計3對shRNA干擾引物，以pmiRZip為載體，構(gòu)建靶向FGF8、SHH、Foxl2基因干擾載體；經(jīng)測序驗證，干擾載體構(gòu)建成
5、功。構(gòu)建成功的FGF8、SHH過表達(dá)載體和FGF8、SHH、Foxl2干擾載體轉(zhuǎn)染雞胚細(xì)胞，驗證表達(dá)載體和干擾載體效果。3.分析FGF8、SHH、Foxl2基因?qū)ε咛グl(fā)育的影響，分別將FGF8、SHH、FOXL2基因表達(dá)和干擾載體轉(zhuǎn)染雞胚細(xì)胞，檢測相關(guān)基因表達(dá)，實驗結(jié)果得出：當(dāng)FGF8基因表達(dá)量發(fā)生變化時，在MAPK信號通路中，細(xì)胞間的鏈接蛋白Grb2表達(dá)水平降低，進(jìn)而影響后續(xù)一系列信號傳遞與通路的激活，使胚胎不能正常生長發(fā)育。在Hedgehog信號通路中，干擾SHH基因的表達(dá)時Hedgehog信號通路不能夠被激活而處于抑制狀態(tài)，使胚胎早期不能夠正常發(fā)育，當(dāng)SH
6、H基因過表達(dá)時，能夠成功激活Hedgehog信號通路，并且過度激活，同樣對胚胎產(chǎn)生負(fù)面影響，例如胚胎出現(xiàn)畸形。干擾Foxl2基因使其表達(dá)量降低，造成胚胎發(fā)育早期參與性別分化的DMRT1、SOX9、CYP19基因表達(dá)發(fā)生紊亂，而導(dǎo)致在發(fā)育性分化過程中出現(xiàn)異常，使胚胎不能正常生長發(fā)育。關(guān)鍵詞：胚胎發(fā)育；性別分化；雞與鵪鶉屬間雜交；基因過表達(dá)；RNAi；FGF8；SHH；Foxl2論文研究類型：A（基礎(chǔ)研究）IAbstractChickenandquailarepoultryproduction’scommonspecies,chickenandquailaredif
7、ferentgenera,hybridizationbetweenchickenandquailaremoretypicaldistanthybridization,goodresourcesofstudiesgenesfunctionandcomparativegenomics;whilechicken-quailhybridsaredeathslargenumberintheincubationprocess,studieshaveshownthatincompletedevelopmentoftissues,organsandsexualdifferent
8、iationarelea
