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1、密級(jí)：論文編號(hào):中國(guó)農(nóng)變科學(xué)院學(xué)位論文DDX19A識(shí)另ljPRRSV基因組RNA并激活NLRP3炎癥小體DDX19ASensesPRRSVGenomicRNAandActivatesNLRP3fnflammasome碩士研究生.?胡亮指導(dǎo)教師：翁長(zhǎng)江研宄員申請(qǐng)學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研宄方向：獸培養(yǎng)單位：哈爾濱獸醫(yī)研究所中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研宄生院2015年S月密級(jí):論文編號(hào):中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文DDX19A識(shí)別PRRSV基因組RNA并激活NLRP3炎癥小體DDX19ASensesPRRSVGenomicRNAandActivatesNLRP3Inflamm
2、asome碩士研究生：胡亮指導(dǎo)教師：翁長(zhǎng)江研究員申請(qǐng)學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：獸醫(yī)微生物及其分子生物學(xué)培養(yǎng)單位：哈爾濱獸醫(yī)研究所中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationDDX19ASensesPRRSVGenomicRNAandActivatesNLRP3InflammasomeM.S.Candidate：HuLiangSupervisor：Prof.WengChang-jiangMajor：PreventiveVeterinaryM
3、edicineSpecialty:VeterinaryMicrobiologyandMolecularBiologyMay2015摘要豬繁殖與呼吸綜合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSvirus,PRRSV)引起的一類(lèi)嚴(yán)重接觸性傳染病，主要引起懷孕母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊胎及仔豬呼吸道疾病等癥狀。2006年爆發(fā)的由高致病PRRSV(highlypathogenicPRRSV,HP-PRRSV)引起的以高熱、高發(fā)病率和高死亡率為特征的高致病PRRS給我國(guó)的生豬產(chǎn)業(yè)
4、造成了難以估量的經(jīng)濟(jì)損失。HP-PRRSV感染豬肺泡巨噬細(xì)胞(pulmonaryalveolarmacrophages,PAMs)，誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子的大量分泌，引起嚴(yán)重的肺部炎癥癥狀。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果證明弱毒株CH1a、CH1R和疫苗毒株HuN4-F112均不能誘導(dǎo)IL-1β和TNF-α的分泌，而HP-PRRSV毒株HuN4和SDA2卻均能誘導(dǎo)這些細(xì)胞因子的高水平表達(dá)和分泌，表明強(qiáng)弱毒株誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的能力不同。IL-1β作為最重要的炎癥介質(zhì)之一，在啟動(dòng)和放大炎癥反應(yīng)，清除感染，加速組織修復(fù)，活化保護(hù)性免疫反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。大量研究表明，HP-PRR
5、SV感染可以誘導(dǎo)IL-1β的分泌，但是，具體的分子機(jī)制還不清楚。本研究從分子水平探究HP-PRRSV感染誘導(dǎo)IL-1β分泌的機(jī)理。IL-1β的成熟需要兩個(gè)信號(hào)：第一信號(hào)由細(xì)胞編碼的模式識(shí)別受體（Patternrecognitionreceptor,PRRs）啟動(dòng)NF-κB信號(hào)通路活化，促進(jìn)pro-IL-1β的產(chǎn)生；第二信號(hào)由病原相關(guān)分子模式(Pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMPs)或危險(xiǎn)相關(guān)分子模式(DamageAssociatedMolecularPatterns,DAMPs)介導(dǎo)炎癥小體激活，引起pro-caspa
6、se-1活化及pro-IL-1β成熟分泌。本研究證明，HP-PRRSV感染可以誘導(dǎo)pro-caspase-1的活化以及pro-IL-1β的切割成熟。深入研究發(fā)現(xiàn)HP-PRRSV感染可以誘導(dǎo)NLRP3炎癥小體復(fù)合物的形成。敲低NLRP3的表達(dá)顯著抑制PRRSV感染誘導(dǎo)的pro-caspase-1活化和IL-1β分泌。隨后的研究發(fā)現(xiàn)HP-PRRSV基因組RNA可以誘導(dǎo)較高水平的IL-1β分泌，證明HP-PRRSV基因組RNA及其5?UTR轉(zhuǎn)錄物均可以誘導(dǎo)NLRP3炎癥小體的激活。敲低NLRP3的表達(dá)顯著抑制HP-PRRSV基因組RNA及其5?UTR轉(zhuǎn)錄物誘導(dǎo)的IL-1
7、β分泌。本研究用大量數(shù)據(jù)證明了HP-PRRSV感染可以激活NLRP3炎癥小體，且發(fā)現(xiàn)HP-PRRSV基因組RNA就足以激活NLRP3炎癥小體，其誘導(dǎo)IL-1β分泌與病毒的復(fù)制過(guò)程無(wú)關(guān)。病毒RNA可以誘導(dǎo)NLRP3炎癥小體的活化，但是目前還沒(méi)有任何證據(jù)證明NLRP3炎癥小體的組分可以直接識(shí)別病毒的RNA。因此，我們推測(cè)細(xì)胞內(nèi)可能存在未知的病毒RNA受體分子。利用HP-PRRSV感染豬PAMs為模型，通過(guò)抗ASC抗體免疫共沉淀試驗(yàn)和串聯(lián)質(zhì)譜分析鑒定出了DDX19A。我們發(fā)現(xiàn)DDX19A與NLRP3炎癥小體復(fù)合物中的NLRP3相互作用，而不與ASC和caspase-1相
8、互作用。進(jìn)
