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《tweak通過外泌體介導巨噬細胞對卵巢癌轉移調控的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、上海交通大學醫(yī)學院碩士學位論文TWEAK通過外泌體介導巨噬細胞對卵巢癌轉移調控的研究STUDYONTHEMECHANISMOFMACROPHAGESREGULATINGOVARIANCANCERCELLMETASTASISINDUCEDBYTWEAKVIAEXOSOMES學生姓名：胡媛專業(yè)：婦產科學學號：1127219275指導老師：邱麗華教授答辯日期：2015年4月24號培養(yǎng)單位：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院ITWEAK通過外泌體介導巨噬細胞對卵巢癌轉移調控的研究STUDYONTHEMECHANI
2、SMOFMACROPHAGESREGULATINGOVARIANCANCERCELLMETASTASISINDUCEDBYTWEAKVIAEXOSOMES學生姓名：胡媛導師：邱麗華教授指導小組成員：劉偉教授吳霞副教授學號：1127219275專業(yè)：婦產科學研究方向：婦科腫瘤申請學位級別：碩士學位培養(yǎng)單位：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院關鍵詞：TWEAK，外泌體，微小RNA卵巢癌，巨噬細胞，轉移IIIIIIV上海交通大學醫(yī)學院2012級碩士研究生學位論文TWEAK通過外泌體介導巨噬細胞對卵巢癌轉移調控的
3、研究中文摘要第一部分TWEAK通過外泌體途徑介導巨噬細胞抑制上皮性卵巢癌的轉移目的：探討TWEAK是否可通過外泌體途徑介導巨噬細胞對上皮性卵巢癌轉移的調控作用。方法：1.PMA誘導人單核細胞系THP-1為貼壁的巨噬細胞，TWEAK刺激巨噬細胞24h后抽提外泌體，透射電鏡觀察其形態(tài)；2.將THP-1來源的巨噬細胞分泌的外泌體用PKH67（greenfluorescentmembranelinker-dye）染料標記，染料標記后的外泌體刺激上皮性卵巢癌細胞株SKOV312h，DAPI染核后，用激光共聚焦顯
4、微鏡觀察熒光的分布和強度；3.分別將PBS、巨噬細胞分泌的外泌體、TWEAK刺激后巨噬細胞分泌的外泌體與上皮性卵巢癌細胞株SKOV3、HO-8910PM共培養(yǎng)48h后，通過transwell實驗檢測其遷移、侵襲能力。結果：透射電鏡可見巨噬細胞分泌的外泌體呈圓形，直徑在30-100nm；激光共聚焦顯微鏡結果示，PKH67標記的外泌體主要分布在胞質，尤其圍繞核周分布；Transwell實驗結果示，與PBS空白對照組相比，巨噬細胞分泌的外泌體可提高卵巢癌細胞的遷移和侵襲能力，而tweak刺激巨噬細胞后，其分
5、泌的外泌體則可降低卵巢癌細胞的遷移和侵襲能力。結論：THP-1來源的巨噬細胞分泌的外泌體可被卵巢癌細胞內化，TWEAK可通過外泌體途徑逆轉巨噬細胞對上皮性卵巢癌的促轉移作用。V上海交通大學醫(yī)學院2012級碩士研究生學位論文第二部分分析TWEAK作用前后巨噬細胞釋放的外泌體包裹的miRNA的表達譜，明確差異表達的miRNA目的：明確TWEAK作用前后巨噬細胞釋放的外泌體中差異表達的miRNA方法：用PMA誘導人單核細胞THP-1為巨噬細胞后，將TWEAK（0，200ng/ml）分別作用于巨噬細胞24小時
6、后，取上清液抽提外泌體，沉淀后抽提RNA，用agilent人的miRNA芯片進行差異譜檢測。結果：芯片結果示TWEAK作用于巨噬細胞后，巨噬細胞釋放的外泌體中有55種miRNA表達上調，17種miRNA表達下調。文獻報道證實有功能的表達上調的miRNA有15種，其中包括mir-7、mir-148a、mir-140、mir-625等，表達下調的miRNA有4種。結論：TWEAK作用前后巨噬細胞釋放的外泌體中包裹的miRNA表達譜有差異，并選擇mir-7作為繼續(xù)研究的對象。第三部分研究TWEAK作用后巨噬
7、細胞釋放的外泌體運輸miRNA抑制上皮性卵巢癌轉移的機制目的：探究TWEAK作用后巨噬細胞釋放的外泌體通過傳遞miRNA抑制上皮性卵巢癌轉移的具體機制。方法：1.PMA誘導人單核細胞系THP-1為貼壁的巨噬細胞，TWEAK刺激巨噬細胞24h后抽提外泌體，分別將PBS、巨噬細胞分泌的外泌體、TWEAK刺激后巨噬細胞分泌的外泌體與上皮性卵巢癌細胞系SKOV3、HO-8910PM共培養(yǎng)；2.共培養(yǎng)24h后分別提取兩細胞株的RNA，采用Real-timePCR方法檢測TWEAK刺激前后，巨噬細胞分泌的外泌體作
8、用后上皮性卵巢癌細胞系中mir-7的表達情況；3.共培養(yǎng)48h后分別提取兩細胞株的蛋白質，采用WesternBlot方法檢測上皮性卵巢癌細胞株中EGFR蛋白的表達情況，及其下游信號通路AKT和ERK蛋白的磷酸化及非磷酸化的表達情況。VI上海交通大學醫(yī)學院2012級碩士研究生學位論文結果：Real-timePCR結果示TWEAK作用于巨噬細胞后，其分泌的外泌體與SKOV3、HO-8910PM細胞株共培養(yǎng)24h后，兩卵巢癌細胞株中mir-7的表達水平高于TW
