tweak在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用初探

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1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文TWEAK在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用初探姓名：顧李穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：狄文201204上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2009級(jí)博士學(xué)位論文TWEAK在上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用初探摘要研究目的：腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑(TWEAK)是腫瘤壞死因子超家族的新成員，通過與其受體成纖維細(xì)胞因子誘導(dǎo)14(Fnl4)結(jié)合后發(fā)揮作用。TWEAK及其受體Fnl4在多種腫瘤細(xì)胞與組織中表達(dá)，具有廣泛的生物學(xué)活性，在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管形成，提高細(xì)胞侵襲力，誘導(dǎo)炎癥因子表達(dá)等方

2、面發(fā)揮作用。研究表明TWEAK、Fnl4在人卵巢癌組織中表達(dá)，但TWEAK、Fnl4在卵巢癌發(fā)生發(fā)展，侵襲和轉(zhuǎn)移以及對(duì)免疫細(xì)胞的作用及作用機(jī)制尚未見報(bào)道。本研究目的在于通過對(duì)TWEAK在卵巢癌轉(zhuǎn)移中起到的作用進(jìn)行初步探討，對(duì)今后發(fā)展新的治療方法提供有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)。研究方法：1．采用體外實(shí)驗(yàn)的方法觀察TWEAK對(duì)HO．8910PM細(xì)胞侵襲、移動(dòng)和粘附能力的影響，觀察TWEAK對(duì)細(xì)胞Iv,B．0【、NF．r,．B(P65)和VEGF蛋白表達(dá)的影響，以及應(yīng)用NF．r,B拮抗劑吡咯醛二硫氨基甲酸(pyrroli

3、dinedithiocarbamate，PDTC)處理后VEGF的變化趨勢(shì)，探討TWEAK在卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用、可能機(jī)制及其信號(hào)傳導(dǎo)途徑。V上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2009級(jí)博士學(xué)位論文2．使用免疫組化方法檢測(cè)不同卵巢腫瘤組織中TWEAK，F(xiàn)nl4，VEGF，微血管(CD34)的表達(dá)情況。對(duì)表達(dá)情況進(jìn)行分析，并與樣本的臨床信息進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)，尋找TWEAK，F(xiàn)nl4；VEGF,微血管(CD34)在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達(dá)特點(diǎn)及其相互之間的關(guān)系。3．采用體外細(xì)胞共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)方法，觀察TWEAK刺激后的THP一

4、1細(xì)胞上清對(duì)卵巢癌細(xì)胞HO．8910PM在細(xì)胞增殖、侵襲能力上的影響。使用realtimePCR及ELISA方法檢測(cè)TWEAK刺激后HO．8910PM中MCP．1mRNA以及蛋白的表達(dá)變化，采用ELISA方法檢測(cè)TWEAK刺激后THP．1細(xì)胞表達(dá)TNF．a(chǎn)的變化。采用TWEAK與TNF．Ⅱ共刺激的方法觀察卵巢癌細(xì)胞的增殖能力。闡述TWEAK刺激后的巨噬細(xì)胞在卵巢癌轉(zhuǎn)移中可能起到作用的途徑。4．采用體外實(shí)驗(yàn)的方法探討NF．r．B微小RNAl99a在細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響，采用westernblot的方法觀察微

5、小RNAl99a轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞內(nèi)NF．1(B通路的影響，尋找微小RNAl99a與TWEAK在細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的共通點(diǎn)及相互關(guān)系，為今后的研究打下基礎(chǔ)。研究結(jié)果：1．TWEAK對(duì)人卵巢癌細(xì)胞HO．8910PM增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制研究。(1)TWEAK對(duì)人卵巢癌細(xì)胞HO一8910PM的增殖沒有影響。(2)TWEAK能夠增強(qiáng)HO一8910PM細(xì)胞對(duì)Matrigel的粘附能力。VI上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2009級(jí)博士學(xué)位論文(3)TWEAK能促進(jìn)HO-8910PM細(xì)胞的遷移和侵襲能力。(4)TWEAK能在HO

6、．8910PM細(xì)胞中促進(jìn)NF一1cB的激活以及Ird3的磷酸化。(5)TWEAK通過NF—rB通路的激活能夠促進(jìn)VEGF的表達(dá)。(6)NF．rJ3抑制劑能夠抑制TWEAK誘導(dǎo)的細(xì)胞粘附遷移和侵襲。2．TWEAK，F(xiàn)nl4，VEGF以及新生微血管(CD34)在卵巢癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)病理資料分析(1)TWEAK和Fnl4的表達(dá)水平在惡性腫瘤中要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于良性腫瘤(P

7、4的表達(dá)，結(jié)果各組也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，只要是卵巢癌，其表達(dá)均在80％以上。(4)不同卵巢組織中VEGF的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；各組間微血管(CD34)計(jì)數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，均以惡性腫瘤組為最高。(5)TWEAK與VEGF的表達(dá)呈一個(gè)正相關(guān)的形式(CorrelationCoefjficient=0．704)。3．TWEAK對(duì)巨噬細(xì)胞的影響在卵巢癌轉(zhuǎn)移中的作用研究。(1)TWEAK能夠通過刺激巨噬細(xì)胞影響HO．8910PM細(xì)胞的增殖力。(2)TWEAK能夠通過巨噬細(xì)胞來抑$tJHO．8910PM細(xì)胞的侵襲能力。Ⅶ上海交通大

8、學(xué)醫(yī)學(xué)院2009級(jí)博士學(xué)位論文(3)TWEAK能夠誘導(dǎo)HO．8910PM細(xì)胞MCP．1(單核細(xì)胞趨化蛋白．1)mRNA以及蛋白的表達(dá)。(4)TWEAK能夠上調(diào)THP-1細(xì)胞TNF．僅的表達(dá)。(5)TWEAK和TNF．僅共同作用能夠抑制HO-8910PM的增殖。4．有關(guān)NF．KB通路與miR．199a在細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的擴(kuò)展研究(1)MiR-199a在內(nèi)異癥患者中的在位內(nèi)膜和卵巢異位內(nèi)膜中的表達(dá)是降低的