低氧誘導(dǎo)自噬促進(jìn)上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究

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1、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)博士學(xué)位論文上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文低氧誘導(dǎo)自噬促進(jìn)上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究TheRoleofHypoxia-InducedAutophagyintheMetastasisofEpithelialOvarianCancer研究生：唐中園學(xué)號(hào)：0107219156導(dǎo)師：李衛(wèi)平教授指導(dǎo)小組成員：狄文教授邱麗華副教授季芳副教授劉偉副教授學(xué)科(專業(yè))：婦產(chǎn)科學(xué)答辯日期:2013年4月萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)博士學(xué)位論文上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文低氧誘導(dǎo)自噬促進(jìn)上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制研

2、究TheRoleofHypoxia-InducedAutophagyintheMetastasisofEpithelialOvarianCancer研究生：唐中園學(xué)號(hào)：0107219156導(dǎo)師：李衛(wèi)平教授學(xué)科(專業(yè))：婦產(chǎn)科學(xué)答辯日期:2013年4月研究方向：卵巢癌發(fā)病機(jī)制研究申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士培養(yǎng)單位：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院資助基金項(xiàng)目：2011年度國(guó)家自然科學(xué)基金（項(xiàng)目批準(zhǔn)號(hào):81101972）萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)博士學(xué)位論文上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師

3、的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)博士學(xué)位論文上海交通大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)上海交通大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)

4、容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)博士學(xué)位論文低氧誘導(dǎo)自噬促進(jìn)上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究摘要研究目的：上皮性卵巢癌死亡率居?jì)D科惡性腫瘤之首。大多數(shù)患者就診時(shí)已處于晚期階段，雖然手術(shù)聯(lián)合化療是治療晚期卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)，但患者極易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。因此，深入探討上皮性卵巢癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制，并尋求新的治療策

5、略以改善晚期卵巢癌的治療效果和生存率是亟待解決的關(guān)鍵問題。近年來，越來越多的研究表明自噬在卵巢癌發(fā)病機(jī)制及治療中起著多重作用，但自噬究竟是促進(jìn)還是防止腫瘤的形成、增殖和轉(zhuǎn)移一直有爭(zhēng)議。另外，在多種腫瘤中也發(fā)現(xiàn)缺氧和HIF-1α可在不同的水平調(diào)節(jié)自噬，與腫瘤發(fā)生進(jìn)展、預(yù)后和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。綜上，本論文研究在缺氧環(huán)境下上皮性卵巢癌中自噬發(fā)生的情況及HIF-1α對(duì)其的調(diào)控，同時(shí)在細(xì)胞及動(dòng)物水平探討缺氧-自噬在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中的重要作用，并探討可能涉及的分子機(jī)制，為卵巢癌的靶向治療和新藥研發(fā)提供理論依據(jù)和新的治療靶點(diǎn)。研究方法：1、在常

6、氧和缺氧培養(yǎng)體系下，在上皮性卵巢癌細(xì)胞株（HO8910PM和HO8910）中，通過免疫印跡法和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)自噬效應(yīng)分子Beclin1、LC3，以及HIF-1α的蛋白水平和核移位，探討缺氧誘導(dǎo)的自噬發(fā)生情況。2、分別在常氧和缺氧培養(yǎng)體系下，在上皮性卵巢癌細(xì)胞株，轉(zhuǎn)染HIF-1α質(zhì)?；騭iRNA-HIF-1α，或用藥物NSC606985干預(yù)HIF-1α，進(jìn)一步驗(yàn)證缺氧環(huán)境下HIF-1α萬方數(shù)據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2010級(jí)博士學(xué)位論文對(duì)自噬的調(diào)控。3、應(yīng)用自噬抑制劑3-MA或基因沉默技術(shù)抑制缺氧誘導(dǎo)的自噬，通過粘附實(shí)驗(yàn)、Tran

7、swell遷移實(shí)驗(yàn)或Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)，分別觀察上皮性卵巢癌細(xì)胞株粘附、遷移和侵襲能力的改變，并考察RhoA信號(hào)途徑及F-actin裝配情況的差異，探討低氧誘導(dǎo)的自噬在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，以及可能涉及的細(xì)胞骨架調(diào)控機(jī)制。4、通過建立裸鼠HO8910PM原位移植瘤模型，并給予自噬抑制劑3-MA處理，比較原發(fā)瘤瘤重及多臟器轉(zhuǎn)移情況，同時(shí)分析其腫瘤原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中自噬發(fā)生的情況，在動(dòng)物水平初步探討自噬與卵巢癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并評(píng)估3-MA的抗癌效果，為其潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值提供數(shù)據(jù)支持。研究結(jié)果：1、低氧微環(huán)境能夠激活HIF-1

8、α，并誘導(dǎo)上皮性卵巢癌細(xì)胞發(fā)生自噬。新型喜樹堿類藥物NSC606985在納摩爾濃度即可發(fā)揮對(duì)HIF-1α的調(diào)控作用，也因而實(shí)現(xiàn)對(duì)自噬的調(diào)控，但藥物效應(yīng)有細(xì)胞類型特異性。2、自噬抑制劑或基因沉默技術(shù)阻斷低氧誘導(dǎo)的自噬可抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。低氧誘導(dǎo)自噬促進(jìn)上皮性卵巢癌