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《wntβ-catenin信號通路對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：406521212489南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Wnt/β-catenin信號通路對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響RolesofWnt/β-cateninsignalinginneuraldifferentiationofhumanbonemarrowmesenchymalstemcells施劍明培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：殷明教授主任醫(yī)師殷嫦嫦教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：外科學(xué)（骨外）論文答辯日期：2015年5月答辯委員會(huì)主席：馬勇評閱人：張斌熊龍2015年5月學(xué)位
2、論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名（手寫）：施劍明簽字日期：2015年6月7日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解南昌大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授
3、權(quán)南昌大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)北京萬方數(shù)據(jù)股份有限公司和中國學(xué)術(shù)期刊（光盤版）電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)，同意按“章程”規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。學(xué)位論文作者簽名（手寫）：施劍明導(dǎo)師簽名（手寫）：殷明簽字日期：2015年6月7日簽字日期：2015年6月9日論文題目Wnt/β-catenin信號通路對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響姓名施劍明學(xué)號40
4、6521212489論文級別博士□碩士√院/系/所醫(yī)學(xué)院專業(yè)外科學(xué)（骨外）E_mail備注：√公開□保密（向校學(xué)位辦申請獲批準(zhǔn)為“保密”，年月后公開）I摘要摘要目的：探討堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basicfibroblastgrowthfactor，bFGF）、表皮生長因子（epidermalgrowthfactor，EGF）單獨(dú)及聯(lián)合對人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（humanbonemarrowmesenchymalstemcells，hBMSCs）向神經(jīng)細(xì)胞分化的影響，并進(jìn)一步研究Wnt/β-catenin信號通路在hBMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化中的作用。方法
5、：（1）將購自江陰齊氏生物科技有限公司第2代hBMSCs進(jìn)行傳代、純化，取第4代hBMSCs進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面骨髓基質(zhì)標(biāo)志CD44、CD90和造血細(xì)胞標(biāo)志CD19、CD34。（2）取第4-6代干性維持較好的hBMSCs，以含1%FBS的α-MEM為基礎(chǔ)誘導(dǎo)培養(yǎng)基，根據(jù)誘導(dǎo)條件不同分為5組：空白對照組（不添加任何物質(zhì)）、EGF組(添加20ng/mLEGF)、bFGF組(添加20ng/mLbFGF)、EGF+bFGF組(添加20ng/mLEGF及20ng/mLbFGF)、EGF+bFGF+DKK-1組（添加20ng/mLEGF、20ng/mLbF
6、GF及100ng/mLDKK-1），倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。（3）連續(xù)誘導(dǎo)7d后，采用RT-PCR檢測神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志nestin，神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)志NSE、MAP-2，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志GFAPmRNA表達(dá)水平，Westernblot及免疫熒光檢測NSE、GFAP蛋白表達(dá)水平。（4）連續(xù)誘導(dǎo)7d后，采用RT-PCR檢測Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵組件GSK-3β、β-catenin、cyclinD1mRNA表達(dá)水平，Westernblot檢測總β-catenin、P-β-catenin、Cytoplasm-β-catenin、Nucleu
7、s-β-catenin蛋白表達(dá)水平，免疫熒光檢測β-catenin蛋白亞細(xì)胞分布情況。結(jié)果：（1）第4代hBMSCs基本呈單一成纖維細(xì)胞樣，漩渦狀、魚群樣貼壁生長，流式鑒定結(jié)果示CD44、CD90表達(dá)分別為98.24%、95.89%，而CD19、CD34合計(jì)表達(dá)僅為1.91%。（2）連續(xù)誘導(dǎo)7d后，bFGF組、EGF+bFGF組及EGF+bFGF+DKK-1組細(xì)胞胞體變小，形成雙極和復(fù)雜多極的細(xì)胞體，部分細(xì)胞向四周伸出突起，且少II摘要數(shù)細(xì)胞相鄰?fù)黄痖g存在網(wǎng)絡(luò)樣連接，呈典型的神經(jīng)樣細(xì)胞形態(tài)，而空白對照組與EGF組細(xì)胞形態(tài)無明顯改變。（3）神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志
8、檢測結(jié)果：RT-PCR檢測示：與空白對照組比較，bFGF組nestin、NSE、MAP-2表達(dá)升高（P<0.
