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《β3-ar對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響及介導(dǎo)機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、類號(hào)：R54密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：2012109066單位代碼：10759石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文β3-AR對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響及介導(dǎo)機(jī)制研究學(xué)位申請(qǐng)人馬苗苗指導(dǎo)教師王麗申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別醫(yī)學(xué)碩士學(xué)科、專業(yè)名稱內(nèi)科學(xué)研究方向冠心病的基礎(chǔ)與臨床研究所在學(xué)院醫(yī)學(xué)院中國(guó)·新疆·石河子2015年06月Studyofβ3-AReffectonmyocardialcellapoptosisandmediatedmechanismADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsf
2、ortheDegreeofMasterofMedicineByMaMiaomiaoInternalmedicineDissertationSupervisor:Pro.WangLiJune，2015石河子大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的學(xué)位論文是在我導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個(gè)人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。研究生簽名：時(shí)間：2015年6月10日使用授權(quán)聲明本人完全了解石河子大學(xué)有關(guān)保留
3、、使用學(xué)位論文的規(guī)定，學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版。有權(quán)交學(xué)位論文在學(xué)校圖書(shū)館保存并允許被查閱。有權(quán)自行或許可他人將學(xué)位論文編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)提供檢索服務(wù)。有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。研究生簽名：時(shí)間：2015年6月10日導(dǎo)師簽名：時(shí)間：2015年6月10日摘要目的：采用去甲腎上腺素（noradrenaline，NE）誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，分別應(yīng)用β3-AR激動(dòng)劑及阻滯劑進(jìn)行干預(yù)，觀察β3-AR對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響，探討β3-AR與PI3K/Akt和p38MAPK信號(hào)通路對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的
4、作用，為β3-AR的信號(hào)通路研究提出新的理論。方法：使用優(yōu)化的Ⅱ型膠原酶和差速貼壁法分離培養(yǎng)心肌細(xì)胞，分別用總蛋白法、超速離心法、試劑盒法提取心肌細(xì)胞β3-AR膜蛋白。BCA法進(jìn)行蛋白定量，Westernblot法檢測(cè)蛋白樣品中β3-AR提取蛋白的特異性。實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組；NE誘導(dǎo)組：NE培養(yǎng)48h；BRL組：β3-AR激動(dòng)劑（BRL37344）干預(yù)+NE培養(yǎng)48h；SR組：β3-AR阻滯劑（SR59230A）干預(yù)+NE培養(yǎng)48h。TUNEL法及流式細(xì)胞儀雙染法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率；Westernblot檢測(cè)各組凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Bax和caspases
5、-3蛋白的表達(dá)；Westernblot和qRT-PCR檢測(cè)各組PI3K/Akt和p38MAPK信號(hào)通路蛋白和mRNA的表達(dá)。結(jié)果：1.優(yōu)化心肌細(xì)胞的培養(yǎng)方法可獲得產(chǎn)量大、濃度高的細(xì)胞，能滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)；2.與其他組比較，試劑盒法提取蛋白的濃度最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Westernblot檢測(cè)結(jié)果示：與其他組比較，試劑盒提取法所得β3-AR膜蛋白含最高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；3.TUNEL法及流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率：BRL組細(xì)胞凋亡率明顯增高，與NE誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；4.Westernblot檢測(cè)結(jié)果
6、示：BRL組caspases-3和Bax/Bcl-2比值增高，與NE誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；5.Westernblot檢測(cè)結(jié)果示：BRL組磷酸化的p38MAPK蛋白表達(dá)增高，與NE誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；SR組磷酸化的Akt蛋白表達(dá)增高，與NE誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：1.試劑盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的濃度和特異性；2.β3-AR可促進(jìn)體外培養(yǎng)NE誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡；3.β3-AR過(guò)度激活可通過(guò)下調(diào)PI3K/Akt信號(hào)和上調(diào)p38MAPK信號(hào)通路促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵詞：心肌細(xì)胞；β
7、3腎上腺素能受體；細(xì)胞凋亡；Akt；p38MAPKIAbstractObjective:Aimedtodeterminetheeffectsofβ3-ARonthepromotionofapoptosisandonnorepinephrine(NE)injurythoughtβ3-adrenoceptoragonistandβ3-adrenoceptorinhibitor.Toexplorewhethertheβ3-ARmediatemyocardialapoptosiscontactwithPI3K/Aktandp38MAPKpathwayanditmaypu
8、tforwardanew
