山核桃嫁接過程中auxiaa基因功能研究和小rna測序分析

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1、々料鑛巧級(jí)不保密Ｕ口￡５７７碩±學(xué)位論文５山核桃嫁梭過程中Ａｕｘ／ＩＡＡ遮因功能研究和?。遥危牐翜y序分析作者姓名：司馬晚嬌指皆教師＝漲炳松教授專業(yè)學(xué)位名稱：化物化學(xué)與分子化物學(xué)研究方向：經(jīng)巧林培巧巧利用所在學(xué)院：林業(yè)巧生物技術(shù)學(xué)院論義提交日期：２０１５年４月浙江農(nóng)林大學(xué)２０１５年４月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人盧明，所呈交的學(xué)位論文，是在鄭柄松導(dǎo)師指導(dǎo)下，通邊我的努力取得的成果，并置是白己撰寫的。盡我所知，除ｒ文中作了標(biāo)巧和致謝中已經(jīng)作Ｔ笞

2、謝的地方外，論文中不包含其他人技表或撰寫過的硏兜成聚，也不狂含在浙江農(nóng)林大學(xué)或其化巧育機(jī)構(gòu)喪得學(xué)位或化書而使用過丄一的村料，。如。ｊ我同巧本研巧做出貢獻(xiàn)的同志都巧論義中作了叨賄的說明并巧示了謝意被查ｆ有嚴(yán)重怯犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)化巧巧，由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任－學(xué)位論文作者親筆簽名：弓受蠟去曰期：玉方論文使用授權(quán)的說明本人完全了解浙注林學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)巧，即學(xué)校有權(quán)送巧論文的復(fù)印件，Ｌ化許論文被查間和借閒，可：Ａ：學(xué)校巧Ｗ公布論文的全部或部分內(nèi)容采用影印、縮印或其他復(fù)制手段

3、保存論立。。，在后解密可適用本授權(quán)書□保密＾年／■不保密。因，本學(xué)位論文屬于不保密。＂（請?jiān)诜娇騼?nèi)打Ｖ）學(xué)位論文作者豪筆簽名：曰期：，／、．Ｉ＊弓曼蜂手指導(dǎo)教師親筆簽名：丘堂技＿日巧；認(rèn)也化ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterFunctionalstudayofaprimaryauxin-responsiveAux/IAAgeneCcIAA1andsmallRNAsequencinganalysisdurin

4、ggraftprocessCandidate:SIMAXiaojiaoAdviser:ZhengBingsongSpecialty:BiochemistryandMolecularBiologyDateofSubmission:April,2015ZhejiangA&FUniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaApril,2015中文摘要中文摘要作為山區(qū)農(nóng)民脫貧致富的主要經(jīng)濟(jì)樹種，山核桃（CaryacathayensisSarg.）具有很多困難的問題比如童期較長，不

5、容易采收，樹體高大以及園藝化栽培等，這就是山核桃的產(chǎn)業(yè)發(fā)展上的巨大難題。但是植物嫁接手段是植物的無性繁殖里面比較重要的植物栽培技術(shù)，也是解決山核桃優(yōu)良種質(zhì)及園藝栽培的重要手段。并且隨著嫁接的成熟，人們開始探討嫁接的機(jī)理問題，從而能夠更好地指導(dǎo)嫁接。本研究根據(jù)基因克隆獲得山核桃生長素原初響應(yīng)基因（CcIAA）片段，采用RACE技術(shù)克隆CcIAA基因的cDNA全長，同時(shí)進(jìn)行同源性比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，并利用qRT-PCR，Westernblot技術(shù)分析了在山核桃嫁接過程中CcIAA基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上的表達(dá)情況

6、。同時(shí)為了探究小RNA在山核桃的嫁接過程里面所起到的功能作用，研究了山核桃嫁的接過程里三個(gè)不同階段（0天，7天和14天）的小RNA測序數(shù)據(jù)生物信息學(xué)分析。主要的研究結(jié)果：1克隆獲得的CcIAAcDNA從起始的密碼子atg，到終止的密碼子tga一共含有591個(gè)堿基，共編碼196個(gè)氨基酸。CcIAA與17種樹種的17個(gè)基因進(jìn)行同源性比對(duì)，發(fā)現(xiàn)該基因與其他植物Aux/IAA基因同源性比較高。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析同樣表明CcIAA與蓖麻RcIAA基因聚為一類，說明它們的親緣關(guān)系最相近，而與其關(guān)系比較遠(yuǎn)的則是鷹嘴豆CaIAA

7、和菜豆PvIAA。2利用qRT-PCR技術(shù)，對(duì)不同激素處理?xiàng)l件下（如空白的對(duì)照，4mg/lIAA和0.3ug/lNPA）不同嫁接時(shí)間段（0d,1d,3d,5d,7d和14d）山核桃CcIAA基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果說明：對(duì)照組里面，山核桃CcIAA基因表達(dá)量在砧木和接穗中都是從嫁接前到嫁接后7天都是持續(xù)下降的，并且在7天時(shí)其表達(dá)量幾乎為0，但是到14天其表達(dá)量會(huì)比嫁接前更高。通過IAA處理的山核桃CcIAA基因表達(dá)量在嫁接后1天會(huì)急劇升高，在隨后的4天里，該基因的表達(dá)量逐漸下降，然后一直到14天，其表達(dá)量

8、都是上升的。砧木和接穗中該基因的表達(dá)趨勢一致。通過NPA處理，無論是接穗還是砧木，山核桃CcIAA基因表達(dá)量明顯在嫁接之后7天里都是比較低的，到14天明顯升高。用IAA處理過的山核桃CcIAA基因表達(dá)量和對(duì)照相比是升高的，而用NPA處理過的山核桃CcIAA基因表達(dá)量和對(duì)照相比也是升高的，但是用IAA處理的表達(dá)量表達(dá)量則升嫁接前期卻沒有NPA處理后上升明顯。I中文摘要3利用Westernblot技術(shù)，