探索量子點(diǎn)的在免疫分析中的應(yīng)用

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1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文量子點(diǎn)的在免疫分析中的應(yīng)用姓名:邵君申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):化學(xué)工程指導(dǎo)教師:高峰20070101上海交通大學(xué)碩士論文量子點(diǎn)在免疫分析中的應(yīng)用摘要隨著納米科技的興起,量子點(diǎn)以其獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)在許多領(lǐng)域表現(xiàn)出潛在的應(yīng)用價(jià)值,引起了人們濃厚的研究興趣。由于其強(qiáng)于有機(jī)染料的熒光穩(wěn)定性、激發(fā)光譜寬、發(fā)射光譜窄等優(yōu)點(diǎn),量子點(diǎn)作為標(biāo)記物應(yīng)用于免疫診斷和免疫分析中,逐漸取代傳統(tǒng)的三大標(biāo)記技術(shù)。因此探索用量子點(diǎn)標(biāo)記建立快速簡便的免疫學(xué)定量檢測方法,有重要的研究意義。本文研究了pH值、緩沖溶液、溫度、保存時(shí)間、氨基酸和蛋白質(zhì)對量子點(diǎn)熒光性能的影響。采用連接劑將蛋白

2、質(zhì)與量子點(diǎn)偶聯(lián),通過酶聯(lián)免疫競爭抑制法和斑點(diǎn)免疫滲濾法檢測標(biāo)記到量子點(diǎn)上蛋白質(zhì)的活性。量子點(diǎn)和蛋白質(zhì)連接后粒子分散性好,具有生物活性,可應(yīng)用于免疫學(xué)檢測。利用量子點(diǎn)的光學(xué)性能,建立了兩種新穎的量子點(diǎn)標(biāo)記的免疫分析方法,即量子點(diǎn)標(biāo)記的免疫凝集分析法和量子點(diǎn)-納米金熒光淬滅分析法,檢測溶液中抗體或抗原的濃度。量子點(diǎn)標(biāo)記的免疫凝集分析法是:采用量子點(diǎn)標(biāo)記羊抗鼠IgG與鼠IgG免疫反應(yīng)后形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),使量子點(diǎn)發(fā)生凝集,熒光信號減低,研究反應(yīng)溶液中量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的變化,建立量子點(diǎn)標(biāo)記的免疫凝集分析法,定量檢測鼠IgG的濃度,最低檢測極限為1.3nmol/L。量子點(diǎn)-納米金熒光淬滅

3、免疫分析法是采用量子點(diǎn)和納米金粒子分別標(biāo)記待測抗原相匹配的兩種抗體,通過免疫反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物,使量子點(diǎn)與金粒子的距離靠近,量子點(diǎn)的能量轉(zhuǎn)移給金粒子,引起量子點(diǎn)熒光淬滅,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在570nm處信號淬滅的程度與體系中被6上海交通大學(xué)碩士論文測物量存在相關(guān)性,據(jù)此建立了量子點(diǎn)-納米金免疫熒光淬滅分析法定量檢測乙肝表面抗原,檢測極限達(dá)0.928ng/mL。以上兩種方法只需檢測反應(yīng)體系中量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度的變化就可檢測靶物質(zhì)的濃度,不需要分離抗原抗體的復(fù)合物,可直接檢測,該方法簡單方便,靈敏度高,在免疫分析和疾病診斷中有著廣闊的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞:量子點(diǎn),蛋白質(zhì),納米金粒子,

4、免疫分析,熒光淬滅7上海交通大學(xué)碩士論文APPLICATIONSOFQUANTUMDOTSINIMMUNOASSAYSABSTRACTQuantumdots(QDs),asaclassofnanomaterialswithmanyuniqueproperties,havebeenexploredpotentialapplicationsinbiomoleculardetection.Incompassionwithorganicdyes,QDsoffersuchadvantagesasbetterfluorescencestabilities,narrowemissio

5、nbandwidthsandbroadabsorptionspectra.Asamarkerappliedinimmunediagnoseandimmunoassay,itisatrendthatQDsareinsteadofthreetraditionallabeledtechnologies.ItisimportanttoresearchthequantificationalimmunedetectionbyQDs.HereinnovelimmunoassayswereestablishedbyQDsfortheirfluorescenceproperties.In

6、fluencesofpH,buffers,temperature,savetime,aminoacidsandproteinsonfluorescenceofQDswerestudied.QDslinkedwithproteinsbyEDC.CompetitiveinhibitionELISAmethodofmagneticparticles-SAandCdTe-SAtoBiotin-HRPanddotimmuno-percolationwereusedtodetectthebiologicactivityofproteinsafterlabeling.Theresul

7、tsprovedthattheCdTe-ptoteincompositecouldbeappliedinimmunoassaysasithadgooddispersivityandgoodbioactivity.UtilizingthefluorescencepropertiesofQDs,twonovelimmunoassayswereestablished,whichweretheaggregation-basedimmunoassayandfluorescencequenchingimmunoassay.Thesetwomethod

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