多頭帶絳蟲黏著蛋白家族基因克隆與功能鑒定

多頭帶絳蟲黏著蛋白家族基因克隆與功能鑒定

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1、密級(jí):論文編號(hào):中囯農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文多頭帶絳蟲黏著蛋白家族基因克隆與功能鑒定MolecularCloningandFunctionIdentificationofAdhesionProteinGeneFamilyfromTaeniamulticeps碩士研究生:岳龍指導(dǎo)教師:付寶權(quán)研究員申請(qǐng)學(xué)位類別:獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱:獸醫(yī)培養(yǎng)單位:蘭州獸醫(yī)研究所研究生院2015年5月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研宂成果。盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包

2、含其俾人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研宄成果,也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研宄所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院可以闬不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文評(píng)閱人、答辯委員會(huì)

3、簽名表論文題目多頭帶絳蟲黏著蛋白家族基因克隆與功能鑒定人獸共患病與獸論文作者岳龍專業(yè)獸醫(yī)研宄方向醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師付寶權(quán)培養(yǎng)單位(研宄所)蘭州獸醫(yī)研宄所碩(博)姓名職稱單位專業(yè)簽名導(dǎo)師評(píng)碩導(dǎo)s/臧榮盡教授西北民族大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)口閱碩導(dǎo)口中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州人賈萬忠研宂員預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)0獸醫(yī)研宄所答辯主席碩導(dǎo)口景濤教授蘭大醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)博導(dǎo)d碩導(dǎo)0楊孝樸教授甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)口碩導(dǎo)0魏鎖成教授西北民族大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)口答碩導(dǎo)口劉光遠(yuǎn)研宄員蘭州獸醫(yī)研宄所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)sf4丨齡辯碩導(dǎo)口蔡建平研宂員蘭州獸

4、醫(yī)研究所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)0委碩導(dǎo)口朱啟運(yùn)研宄員蘭州獸醫(yī)研宄所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)0員碩導(dǎo)口劉永生研宄員蘭州獸醫(yī)研究所預(yù)防獸醫(yī)學(xué)博導(dǎo)s(碩導(dǎo)口博導(dǎo)口會(huì)議記錄(秘書)閆鴻斌論文答辯時(shí)間地點(diǎn)2015年5月13日于蘭州獸醫(yī)研宄所綜合樓五樓會(huì)議室密級(jí):論文編號(hào):中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文多頭帶絳蟲黏著蛋白家族基因克隆與功能鑒定MolecularCloningandFunctionIdentificationofAdhesionProteinGeneFamilyfromTaeniamulticeps碩士研究生:岳龍指導(dǎo)教師:付寶權(quán)研

5、究員申請(qǐng)學(xué)位類別:獸醫(yī)碩士專業(yè)領(lǐng)域名稱:獸醫(yī)培養(yǎng)單位:蘭州獸醫(yī)研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationMolecularCloningandFunctionIdentificationofAdhesionProteinGeneFamilyfromTaeniamulticepsM.S.Candidate:YUELongSupervisor:Prof.FUBaoquanDegree:MasterofVeter

6、inarianSpecialty:VeterinaryMay2015摘要腦多頭蚴?。–erebralcoenurosis)是由多頭帶絳蟲(Taeniamulticeps)的中絳期幼蟲腦多頭蚴(Coenuruscerebralis)引起的一種人畜共患寄生蟲病。腦多頭蚴可寄生于牛、羊等家畜的腦、脊髓等中樞神經(jīng)系統(tǒng),使宿主產(chǎn)生神經(jīng)癥狀,甚至導(dǎo)致死亡,人作為中間宿主亦可偶發(fā)腦多頭蚴病。因此,該病不僅給畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,而且威脅著人體健康。隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展,使用疫苗防治絳蟲蚴病取得了一定的成效,

7、成為目前研究的熱點(diǎn)。本研究以多頭帶絳蟲基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增TmAdh基因家族成員基因組序列,獲得6個(gè)含有N端信號(hào)肽和1個(gè)FnIII結(jié)構(gòu)域的基因序列。利用生物信息學(xué)軟件對(duì)TmAdh家族成員進(jìn)行預(yù)測(cè)分析,發(fā)現(xiàn)其都由3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子組成;序列比對(duì)顯示其蛋白序列一致性在44.9-99.2%;進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)該蛋白屬于帶科絳蟲免疫保護(hù)性抗原家族的一個(gè)新的亞類。以腦多頭蚴cDNA為模板擴(kuò)增出TmAdh1、TmAdh2和TmAdh4cDNA基因片段,TmAdh3基因片段人工合成,將TmAdh1-4基因片段連接至

8、原核表達(dá)載體pGEX4T-1進(jìn)行原核表達(dá)。成功表達(dá)出產(chǎn)物大小約為39.0、38.1、38.9和37.8ku的重組蛋白。利用Western-blot分析TmAdh1-4重組蛋白的反應(yīng)原性,結(jié)果表明腦多頭蚴自然感染綿羊血清與TmAdh3重組蛋白反應(yīng)明顯,而與TmAdh1、TmAdh2和TmAdh4重組蛋白反應(yīng)不明顯。細(xì)胞黏著活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明重組蛋白TmAdh1-4對(duì)中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)和正常鼠腎細(xì)

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