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1、博士學(xué)位論文14株海洋放線(xiàn)菌活性產(chǎn)物篩選及菌株MA03抑AFT效能研究SCREENINGOFBIOACTIVEMETABOLITESFROMFOURTEENMARINEACTINOMYCETESTAINSANDSTUDYONINHIBITORYEFFECTOFSTRAINMA03ONAFT李平哈爾濱工業(yè)大學(xué)2014年12月國(guó)內(nèi)圖書(shū)分類(lèi)號(hào)：X792學(xué)校代碼：10213國(guó)際圖書(shū)分類(lèi)號(hào)：579密級(jí)：公開(kāi)工學(xué)博士學(xué)位論文14株海洋放線(xiàn)菌活性產(chǎn)物篩選及菌株MA03抑AFT效能研究博士研究生：李平導(dǎo)師：閆培生教授申請(qǐng)學(xué)位：工學(xué)博士學(xué)科：環(huán)境科學(xué)與工程
2、所在單位：市政環(huán)境工程學(xué)院答辯日期：2014年12月授予學(xué)位單位：哈爾濱工業(yè)大學(xué)ClassifiedIndex:X792U.D.C.:579DissertationfortheDoctorDegreeinEngineeringSCREENINGOFBIOACTIVEMETABOLITESFROMFOURTEENMARINEACTINOMYCETESTAINSANDSTUDYONINHIBITORYEFFECTOFSTRAINMA03ONAFTCandidate:LiPingSupervisor:Prof.YanPeishengAcadem
3、icDegreeAppliedfor:DoctorofEngineeringSpecialty:EnvironmentalscienceandEngineeringAffiliation:SchoolofMunicipalandEnvironmentalEngineeringDateofDefence:December,2014Degree-Conferring-Institution:HarbinInstituteofTechnology摘要摘要多年來(lái)，黃曲霉毒素（aflatoxin，AFT）對(duì)糧食、中藥材、飼料等的污染是導(dǎo)致家禽家畜體
4、質(zhì)肉質(zhì)下降、人類(lèi)罹患癌癥等健康問(wèn)題的罪魁禍?zhǔn)?。通過(guò)物理、化學(xué)或生物手段有效防治黃曲霉毒素污染是環(huán)境工作者的重要研究?jī)?nèi)容。其中，黃曲霉毒素的微生物防治法是一種既能最大限度的保持農(nóng)作物等產(chǎn)品品質(zhì)、又能減輕對(duì)環(huán)境副作用的有效手段。以14株分離自黃海海域沉積物的海洋放線(xiàn)菌為材料，分別在淡水和海水環(huán)境下對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，獲得發(fā)酵上清液，通過(guò)Tipculture方法，檢測(cè)其抑制寄生曲霉菌絲體生長(zhǎng)和黃曲霉毒素產(chǎn)生的活性，發(fā)現(xiàn)淡水環(huán)境下培養(yǎng)的菌株MA03和MA01對(duì)寄生曲霉菌絲體生長(zhǎng)的抑制率和黃曲霉毒素抑制率均超過(guò)80%，其乙酸乙酯粗提物抑制寄生曲霉菌絲體生
5、長(zhǎng)的IC50值分別為0.275mg/mL和0.106mg/mL。此外，本研究還對(duì)上述14個(gè)菌株的其他生理活性進(jìn)行了檢測(cè)。首先，利用MTT方法，檢測(cè)上述菌株發(fā)酵上清液的抗腫瘤活性，發(fā)現(xiàn)5個(gè)菌株對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖有抑制效果，其中菌株MA03對(duì)3株受試腫瘤細(xì)胞系的抑制率均超過(guò)90%，而且，在相同濃度下，其乙酸乙酯粗提物比商品化的抗腫瘤藥物順鉑（DDP）更能高效地抑制腫瘤細(xì)胞集落的形成。其次，還發(fā)現(xiàn)了2株能產(chǎn)生性質(zhì)穩(wěn)定的色素的菌株MA01（產(chǎn)黃色素）和SHXF02-1（產(chǎn)紅色素）。根據(jù)抑黃曲霉毒素的能力，其次考慮抗腫瘤的活性，選擇10株海洋放線(xiàn)菌，通
6、過(guò)分析16SrDNA序列和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，鑒定菌株MA03和MA09屬于擬諾卡氏菌屬（Nocardiopsis），其余8株菌都屬于鏈霉菌屬（Streptomyces）。其中，7個(gè)菌株（包括MA03）含有II型PKS基因。以菌株MA03為主要研究對(duì)象，針對(duì)其形態(tài)特征、生理生化特征以及系統(tǒng)發(fā)育特征進(jìn)行深入分析，確定菌株MA03屬于白色擬諾卡氏菌蔥綠亞種（Nocardiopsisprasina）。對(duì)菌株MA03進(jìn)行大量發(fā)酵，獲得60L發(fā)酵上清液，然后經(jīng)過(guò)硅膠柱層析、薄層層析、高效液相色譜及質(zhì)譜分析，對(duì)其中抑黃曲霉毒素有效成分進(jìn)行分離鑒定，結(jié)果顯
7、示：海洋擬諾卡氏菌MA03的發(fā)酵液中可能存在春日霉素（Kasugamycin，抗真菌和抗細(xì)菌活性）、PhaeochromycinG（抗腫瘤活性）、1-十三醇（1-Tridecanol，抗菌活性）、手霉素（SW-B，抗真菌活性）、燼灰紅霉素（Cinerubin，抗腫瘤和抗菌活性）、紫紅菌素A（GriseorhodinA，抗菌活性）、Cylopentadecanone（4-methyl）（活性未知）、NocarasinC（抗腫瘤和抗菌活性）、DaryamideC（抗腫瘤和抗真菌活性）、BrasiliquinoneB（抗菌和抗腫瘤活性）和甲基鼠
8、李素（Rhamnazin，抗氧化-I-哈爾濱工業(yè)大學(xué)工學(xué)博士學(xué)位論文活性）。該結(jié)果揭示了海洋擬諾卡氏菌MA03高效的抑黃曲霉毒素和抗腫瘤活性的潛在物質(zhì)基礎(chǔ)，也表明該菌株次級(jí)代謝產(chǎn)物的生理活性具
