石榴木質(zhì)素生物合成關(guān)鍵基因及myb轉(zhuǎn)錄因子的克隆與表達(dá)

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1、．：１０３６４分類號：Ｓ６６５４單位代媽；：學(xué)號：１２７７２密銀２００復(fù)後泉咎義ｆ學(xué)位論文石懼木質(zhì)素生物合咸關(guān)鍵基因及ＭＹＢ轉(zhuǎn)錄因子的克隆與表達(dá)Ｃｌｏｎｉｎｇａ凸ｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎ馬ｌｙｓｉｓｏｆｇｅｎｅｓａｎｄＭＹＢｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｌｉｇｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｔｈｗａｐｙｉｎｏｍｅｒａｎａｔｅＰｕｎｉｃａｒａｎａｔｕｍＬ．ｐｇ（ｇ）研究生：Ｗ丹＃指導(dǎo)教師：張水明副教授合作指導(dǎo)教師

2、：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿申請學(xué)位口類級別：農(nóng)學(xué)碩±專業(yè)領(lǐng)域名稱：果樹學(xué)研充方向：果巧種質(zhì)搔源與生物巧術(shù)育種所在學(xué)院：園藝學(xué)院Ａ＿。答辯委員會主席：＼１二〇—五年六月獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加標(biāo)注和致謝的地方夕ｈ論文中不包含其他人己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成巧，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝

3、意。學(xué)位論文作者簽名：聲舟落／簽字曰期：＾女年女月女曰學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文件，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽農(nóng)業(yè)火學(xué)可＾＾將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，可＾心采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，向社會公眾提供信息服務(wù)。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書）。；學(xué)位論文作者簽名：雜年章指導(dǎo)教師簽名ｒ皆）

4、簽字日期：文年＾月矣日簽字円期：年女月女日工學(xué)位論文作者畢業(yè)后去向：作單位：屯話：通信地址：郵編；摘要石榴（PunicagranatumL.）具有廣泛的經(jīng)濟(jì)價值，集食用、觀賞、綠化、藥用于一體。石榴籽粒包含假種皮、種皮和種仁三個部分，其中硬籽石榴中種皮木質(zhì)素含量較高，食用不便，而軟籽石榴中種皮木質(zhì)素含量較低，核軟可食，無需吐籽，是珍貴的石榴種質(zhì)資源。目前關(guān)于石榴軟籽性狀形成的分子機(jī)制研究較少，本試驗以3個不同籽粒硬度的石榴品種“突尼斯軟籽”、“會理軟籽”和“紅玉石籽”為試材，采用RACE技術(shù)克隆木質(zhì)素生

5、物合成途徑關(guān)鍵基因和MYB轉(zhuǎn)錄因子基因，qRT-PCR技術(shù)監(jiān)測上述基因在石榴不同組織、不同發(fā)育時期和不同品種石榴種皮中的相對表達(dá)量，探討其在石榴木質(zhì)素生物合成中的表達(dá)調(diào)控，為進(jìn)一步研究石榴軟籽性狀形成機(jī)理奠定基礎(chǔ)。試驗獲得的主要結(jié)果如下：1、獲得木質(zhì)素生物合成關(guān)鍵基因PgPAL的3′端序列和PgCCR、PgCOMT、PgLAC的cDNA全長序列。生物信息學(xué)分析表明，PgPAL氨基酸序列與蓖麻、葡萄、歐洲大葉楊的一致性均為90%。PgCCR（GenBank登錄號：KM881713）序列全長1269bp，編碼區(qū)（CDS）為1017bp，編碼

6、338個氨基酸，其氨基酸序列與橡膠樹、沙梨、大麻槿、岡尼桉、歐洲大葉楊的一致性超過82%。PgCOMT（GenBank登錄號：KJ713968）序列全長1456bp，編碼區(qū)（CDS）為1113bp，編碼370個氨基酸，其氨基酸序列與仙女扇、蓖麻、扁桃、赤桉的一致性超過86%。PgLAC（GeneBank登錄號：KM881711）序列全長2128bp，編碼區(qū)（CDS）為1716bp，編碼571個氨基酸，其氨基酸序列與葡萄、茸毛煙草、可可樹、蘋果的一致性超過80%。2、克隆到MYB轉(zhuǎn)錄因子基因PgMYB和PgMYB1，生物信息學(xué)分析表明Pg

7、MYB和PgMYB1的N端都具有兩個MYBDNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，是植物中典型的R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子。其中PgMYB（GenBank登錄號：KM014568）序列全長為1088bp，編碼區(qū)（CDS）為921bp，編碼306個氨基酸，其氨基酸序列與銀合歡、楊樹、擬南芥的一致性超過84%。PgMYB1（GenBank登錄號：KM881712）序列全長987bp，編碼區(qū)（CDS）為792bp，編碼263個氨基酸，其氨基酸序列與金魚草、可可樹、巨桉、茸毛煙草的一致性超過71%。3、熒光定量分析表達(dá)發(fā)現(xiàn)，木質(zhì)素生物合成關(guān)鍵基因和MYB轉(zhuǎn)錄因子基因在

8、石榴的葉片、花瓣和莖中均有不同程度的表達(dá)，PgCCR、PgCOMT、PgLAC和PgMYB均是在莖中相對表達(dá)量最高，其次是在花瓣中表達(dá)較高，葉片中相對表達(dá)量最低，PgPAL和PgMYB1則是在花瓣中相對表達(dá)