lxrs在lps誘導(dǎo)thp-1巨噬細(xì)胞微粒產(chǎn)生中的作用及機(jī)制

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1、＇＇＇－ｋ＇．＾，：．；．：．ＶＶ．；＇中輪ｍ‘―－：。，一－其盧帶．申直，—＊－■、＇Ｖ‘、．‘．井．．■分類號(hào)Ｒ日６３■密級(jí)公開ＵＤＣ６１０學(xué)校代碼１０５５５碩：ｔ學(xué)位論文？？＇（專業(yè)學(xué)位）‘、Ｖ．知種＇掛？＇ＩＬＸＲ－Ｐｓ在ＬＰＳ誘導(dǎo)ＴＨＰ１巨益細(xì)胞微粒產(chǎn)生中的作用及機(jī)制研究生姓名：黃竹萍－指導(dǎo)教師、職稱：王德明畐喊授—■＊；；：．；ｒ專業(yè)學(xué)位類別（領(lǐng)域）：臨床醫(yī)學(xué)（麻

2、醉學(xué)）’＇＾一，Ｖ研究方向：急性肺損傷．護(hù)ｉ．一＇Ｉ，．＇皆．／所在學(xué)院；第二臨床學(xué)院：，一，－‘々？＇＇．Ｖ－ｒＶ：；語(yǔ)－＇一〇五年五月．反Ｌ二Ｗ，古；巧；．＇Ｖ＼．批＇－’＇＇＇＇■’－－．．心主■＇枉－二‘＇片占ｒ．中、說(shuō)：．、’＇啤戶‘＇＇．．巧Ｖ巧巧常ｆ皆＼誠(chéng)，去雜孝４掌ＬＸＲｓ在ＬＰＳ誘導(dǎo)ＴＨＰ－１巨唾細(xì)胞微桓產(chǎn)生中的作巧及機(jī)制論文作者簽名：凌指導(dǎo)教師簽名；１一論文評(píng)閱人

3、：陳萍，教授，碩導(dǎo)，軍慶醫(yī)科大學(xué)附醫(yī)院評(píng)閱人２：聞紅，副教授，碩導(dǎo)，第Ｈ軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院答辯委員會(huì)主席：徐經(jīng)大，教授，碩導(dǎo)，南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院１委；員二，，碩導(dǎo)，中南醫(yī)院王亞平教授大學(xué)湘雅委２；貫何振華院，教授，碩導(dǎo)，南華大學(xué)附屬第二醫(yī)一３委：?jiǎn)T玲，主任醫(yī)師，南華大學(xué)附屬第院胡嘯醫(yī)４委員二醫(yī)；何云武，主任醫(yī)師，南華大學(xué)附屬第院：５７日２０１５年月１日答辯期LXRs在LPS誘導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞微粒產(chǎn)生中的作用及機(jī)制摘要研究背景：ALI/ARDS是臨床上常見的危重癥，過度的

4、炎癥反應(yīng)是ALI/ARDS的特征性表現(xiàn)之一，微粒是炎癥反應(yīng)的重要生物學(xué)標(biāo)志物，在ALI/ARDS的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。巨噬細(xì)胞在ALI/ARDS時(shí)迅速增加，并且對(duì)其產(chǎn)生重要影響。肝X受體能夠減輕ALI/ARDS及其炎癥反應(yīng)，但是其具體機(jī)制尚不清楚，進(jìn)一步研究其機(jī)制對(duì)于ALI/ARDS的防治具有重要意義。目的：通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，觀察肝X受體在LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞微粒產(chǎn)生過程中的作用以及微粒濃度與THP-1巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)的關(guān)系。方法：1、先用PMA100nM刺激THP-1巨噬細(xì)胞貼壁,更換新鮮

5、培養(yǎng)基再用LXRs激動(dòng)劑T0901317（0μM、5μM、10μM、20μM）預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞，6h后更換新鮮培養(yǎng)基,然后用0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細(xì)胞24h，采用westernblot免疫印跡檢測(cè)TLR4蛋白的表達(dá)、ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。2、先用PMA100nM刺激THP-1巨噬細(xì)胞貼壁,更換新鮮培養(yǎng)基再用LXRs激動(dòng)劑T0901317（10μM）預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞（0h、6h、12h、24h），再次更換新鮮培養(yǎng)基后用

6、0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細(xì)胞24h，采用westernblot免疫印跡檢測(cè)TLR4蛋白的表達(dá)、ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。3、先用PMA100nM刺激THP-1巨噬細(xì)胞貼壁,更換新I鮮培養(yǎng)基后將THP-1巨噬細(xì)胞分別進(jìn)行空白對(duì)照處理、LXRs激動(dòng)劑（10μM）處理、TLR4抑制劑TAK-242（3μM）處理，6h后再次更換新鮮培養(yǎng)基，用0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細(xì)胞24h，采用westernblot免疫印跡檢測(cè)TLR4蛋白的表達(dá)、ELIS

7、A檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。結(jié)果：1、LXRs激動(dòng)劑T0901317能顯著抑制THP-1巨噬細(xì)胞TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生，并具有濃度依賴關(guān)系。與0μM組相比，LXRs激動(dòng)劑T0901317在5μM時(shí)即有顯著作用，且隨著LXRs激動(dòng)劑濃度增加抑制作用也增強(qiáng)，20μM組LXRs激動(dòng)劑對(duì)TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生抑制作用最為顯著（P<0.001）。2、LXRs激動(dòng)劑T0901317能

8、顯著抑制THP-1巨噬細(xì)胞TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生，并且在24h內(nèi)具有時(shí)間依賴關(guān)系。與0h組相比，LXRs激動(dòng)劑T090131710μM處理6h時(shí)即有顯著作用，且隨著LXRs激動(dòng)劑作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制作用也增強(qiáng)，24h組LXRs激動(dòng)劑對(duì)TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生抑制最為顯著（P<0.001）。3、THP-1巨噬細(xì)胞微粒濃度與TLR4蛋白表達(dá)水平以及T