畢業(yè)論文--菠蘿超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定

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1、菠蘿超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定重慶師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物科學(xué)2003級梁慧指導(dǎo)教師:許平摘要:本文采用硫酸銨分級沉淀,透析,DEAE-纖維素A-52離子交換柱層析從菠蘿中分離純化SOD并采用Folin-酚法測蛋白質(zhì)含量,鄰苯三酚自氧化法測定SOD酶活性,得到酶的比活力為326.47u/mg·pr,回收率為30.45%,提純倍數(shù)18.40的SOD.同時(shí)得到了電泳純一的SOD。并且分別研究了不同pH值、溫度對菠蘿SOD活性的影響。結(jié)果表明:菠蘿中SOD的活力在20-60℃和pH7.8—8.6范圍內(nèi)穩(wěn)定。

2、且在溫度為25℃,pH為8.2的條件下活力最大。這一研究提供了從高等植物中提取SOD的有效方式。關(guān)鍵詞:超氧化物歧化酶;菠蘿;鄰苯三酚自氧化;活性測定TheMeasurementofActivityofPineappleSODGrade2003BiologyScienceChongqingNormalUniversityLianghuiTutor:XupingAbstract:Inthepaper,Superoxidedismutases(SOD)frompineapplewaspurifiedbyacomb

3、inationofammoniumsulfatefractionation,dialysisandDEAE-celluloseA-52.Thepurifiedenzymewasahighlyhomogeneousproteinwiththespecifecactivityof326.47u/mg·pr.Theyieldrateisabout30.45%,andthemultiplicationisashighas18.40times.Theresultsshowedthattheenzymewasamanga

4、nesesuperoxide.AndwemeasuredtheenzymeindifferentpH,temperature.Theresultsshowedthat:theenzymaticactivityofpineappleisstablewithinthetemperature20—60℃andpH7.8—8.6.IntheconditionofT=25℃,pH=8.2isconfirmedtobethebest.ThisstudyprovidesaneffectiveapproachforSODre

5、searchonhigherplants.KeyWords:Superoxidedismutase;pineapple;pyrogallotautoxidation;activitymeasurement.超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,簡稱SOD),是一類廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶,能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng),平衡機(jī)體內(nèi)的氧自由基,SOD是一類重要的自由基清除劑,它催化超氧陰離子自由基O2.-與H+發(fā)生歧化反應(yīng),生成H2O2和02,反應(yīng)式如下:過氧化氫在過氧化氫酶的作用下進(jìn)

6、一步分解生成H2O和O2,消除O2.-等中間物的毒性。由于O2.-性質(zhì)活潑,極具破壞作用,因而當(dāng)機(jī)體內(nèi)有過多O2.-第12頁(共12頁)積累時(shí)可誘發(fā)多種疾病。SOD作為體內(nèi)自由基的有效清除劑,能使自由基的形成和消除處于動態(tài)的平衡,從而抵御O2.-的毒害作用[1]。因此,SOD已成為化學(xué)及生物化學(xué)研究領(lǐng)域中熱門的研究課題。作為生物體內(nèi)超氧陰離子自由基的清潔劑,SOD在防輻射、抗衰老、消炎、抑制腫瘤和癌癥、自身免疫治療等方面顯示出獨(dú)特的功能,在醫(yī)學(xué)、食品、化妝品等領(lǐng)域得到越來越多的應(yīng)用[2]。目前,世界各地學(xué)者對

7、SOD的研究方興未艾,深入研究SOD不僅有著重大的理論意義,也有著重大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。已開發(fā)的SOD資源有動物血、刺梨、麥葉、果蔬及微生物等。目前,我國主要是從動物血液中提取,并已從牛血中成功地獲得高純度的Cu,Zn—SOD,國外藥用S0D系從牛血中提取,但動物飼養(yǎng)容易受到飼料、疾?。ㄈ绡偱2。┘帮曫B(yǎng)環(huán)境等因素的影響,而用植物原料提取SOD前景廣闊。特別是近年來SOD功能果品系列產(chǎn)品開始流行,其是純天然食品,沒有任何副作用,無污染,無殘毒。人們在食用美味果品的同時(shí),又獲得了當(dāng)前最流行的保健食療品。如SOD獼猴

8、桃,SOD草莓,SOD柑橘。對水果中SOD活性的測定已成為必要,而菠蘿是深受人們喜愛的水果之一,對其SOD活性的測定具有一定的實(shí)際意義。資料表明[3],菠蘿味甘、微酸,性微寒,有清熱解暑、生津止渴、利小便的功效,可用于傷暑、身熱煩渴、消化不良、小便不利、頭昏眼花等癥。而且在果汁中,還含有一種跟胃液相類似的酵素,可以分解蛋白,幫助消化。菠蘿營養(yǎng)豐富,其成分包括糖類、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素A、B1、B2、

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