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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志第25卷第2期2010年3月JModLabMed，V01．25，No．2，March．201031基于適體的熒光納米生物傳感器用于內(nèi)毒素的檢測(cè)歐藝，姚朗(南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院毒理系，廣州510515)摘要：目的利用SELEX技術(shù)篩選出來(lái)的核酸適配體與脂多糖的高親和力來(lái)對(duì)脂多糖進(jìn)行定量定性分析。方法以脂多糖的兩條核酸適配體與鷹多糖的結(jié)合構(gòu)建三明治結(jié)構(gòu)。再利用磁性納米的磁性分離技術(shù)，設(shè)計(jì)并制作一種新型的熒光納米生物傳感器，用其檢測(cè)臘多糖．結(jié)果熒光數(shù)值隨著脂多糖劑量的升高而升高，兩者呈線性關(guān)系，潮定線性范圍為0．0312～4EU／ml，線性方程為△
2、F=8．4708C+6．6796(C單位為EU／m1)，相關(guān)系數(shù)為0．9960。檢出限為0．024EU／ml，且測(cè)得的熒光信號(hào)穩(wěn)定，24h后測(cè)定并無(wú)衰減。結(jié)論在選用磁珠作為基因載體的基礎(chǔ)上，運(yùn)用核酸適配體與目標(biāo)蛋白的強(qiáng)親和力的三明治結(jié)構(gòu)來(lái)檢測(cè)內(nèi)毒素的方法具有很高的檢測(cè)特異性扣靈敏度．關(guān)鍵詞：核酸適配體；脂多糖；磁性納米；熒光中圖分類號(hào)：R392—33文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1671—7414(2010)02—031—03doi：10．3969／j．issn．1671—7414．2010．02．011DetectionofBacteriaiEndotoxinwithaNano—Bi
3、osensorBasedonAptamerFluorescenceOUYi，YAOLang(DepartmentofToxicology，SchoolofPublicHealthandTropicalMedicine，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China)Abstract：ObjectiveThelipopolysaccharidewasanalyzedquantitativelyandqualitativelybasedonitshighaffinitywiththeaptamerscreenedbytheSELEXte
4、chnology．MethodsTwoaptamerandiipopolysaccharidewereconstructedtOasandwichstructure．Thenewtypefluorescencenano—biosensorwasdesignedaccordingtOmagneticseparationtechniqueofthemagneticnanoparticlesfordetectionofthelipopolysaccharide．ResultsThefluorescencevaluesincreasedathigherdosesoflipopolysac
5、charideandtherelationshipbetweenvariableswaslinear．ThelinearrangeofdeterminationWaS0．0312～4EU／ml，thelinearequation△F=8．4708C+6．6796(C，EU／m1)，thecorrelationcoefficient0．9960，andthedetectionlimit0．024EU／m1．Thefluorescencesignalwasstablewithoutattenuationafterbeingdetectedin24hours．ConclusionIti
6、sofhighspecificityandsensitivitytOdetectlipopolysaccharideusingthehighaffinitysandwichstructureconstructedbyaptamerswiththeoftargetproteinbaSedonmagneticbeadsasagenevector．Keywords：aptamer；lipopolysaccharide；magneticnanoparticles；fluorescence感染性疾病是世界十大致命疾病之一，尤其是非發(fā)達(dá)國(guó)家兒童和外傷病人在此類疾病中死亡率較高n]。在感染性疾
7、病中又以革蘭氏陰性菌(gram—negativebacteria，GNB)感染敗血癥、內(nèi)毒素血癥及其休克的臨床死亡率最高。脂多糖(1ipopolysac—charide，LPS)即內(nèi)毒素(endotoxin)是GNB外膜的主要成分，由類脂A核心寡聚糖和0一特異性多糖側(cè)鏈三部分組成，在GNB外膜滲透性和流動(dòng)性的維持及致病過(guò)程中起主要作用[2]，因此檢測(cè)LPS具有重要的醫(yī)學(xué)意義【3]。近年來(lái)，適體(aptamer)作為一種分子識(shí)別元件，越來(lái)越受到關(guān)注。適體是通過(guò)指數(shù)級(jí)富集的配基系統(tǒng)進(jìn)
