鈍頂螺旋藻多糖抗病毒及抗腫瘤作用的研究

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1、中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文鈍頂螺旋藻多糖抗病毒及抗腫瘤作用的研究姓名：于紅申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師：張學(xué)成2003.6.1鈍頂螺旋藻多糖抗病毒及抗腫瘸作用的研究鈍頂螺旋藻多糖抗病毒及抗腫瘤作用的研究摘要本文報(bào)道了鈍頂螺旋藻多糖(PSP)抗病毒作用的研究以及抗腫瘤作用的研究。以改良的三氯乙酸法進(jìn)行提取，所得產(chǎn)品多糖質(zhì)量含量達(dá)92％以上，優(yōu)于傳統(tǒng)的Sevag法?？共《咀饔玫难芯窟x用單純皰疹病毒l型(HSV一1)標(biāo)準(zhǔn)株(SM44)，體外實(shí)驗(yàn)在Vero細(xì)胞中進(jìn)行，在證實(shí)PSP抗HSV一1活性優(yōu)于目前臨床治療該病毒感染的首選藥物阿昔洛韋的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討了PSP

2、抗HSV一1作用的機(jī)制。以不同劑量的PSP作用于病毒復(fù)制周期的各個(gè)階段，以病毒半數(shù)感染量(TCID50)，細(xì)胞病變(CPE)，蝕斑形成單位(PFU)，MTT法及核酸分子雜交作為評價(jià)指標(biāo)，結(jié)果表明，PSP抗HSV—l作用的機(jī)制與阻滯病毒向細(xì)胞吸附，抑制感染細(xì)胞病毒的復(fù)制和抑制HSV一1糖蛋白gG基因的轉(zhuǎn)錄有關(guān)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以PSP治療小鼠HSV-1感染，結(jié)果PSP治療組小鼠的存活率明顯高于對照組。同時(shí)進(jìn)行了PSP抗腫瘤作用的研究，體外實(shí)驗(yàn)以MTT法鍘定PSP對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，光鏡觀察及流式細(xì)胞術(shù)檢測PSP誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞凋亡，首次發(fā)現(xiàn)PSP可明顯抑制HeLa細(xì)胞的增

3、殖，使HeLa細(xì)胞發(fā)生GI期阻滯并誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡：PSP不僅可抑制HepG-2細(xì)胞的增殖，而且可抑制HepG一2細(xì)胞中IGF-2mRNA的表達(dá)；PSP對體外培養(yǎng)的胃腸道癌細(xì)胞亦有明顯的抑制作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察PSP對小鼠S-180肉瘤的抑制作用，PSP在50～200mg／kg的劑量范圍對小鼠S-180肉瘤，均有～定的抑制作用。本研究還采用真核基因表達(dá)技術(shù)，構(gòu)建了HSV一1綠色熒光蛋白報(bào)告基因表達(dá)體系，結(jié)果不僅提示PSP抗HSV-1的機(jī)制可能與抑制HSV～1啟動(dòng)子ICP6活性有關(guān)，同時(shí)將為抗病毒藥物的篩選提供一種簡便、直觀、快速、敏感的方法。關(guān)鍵詞：鈍頂螺旋藻多糖；提

4、?。嚎共《咀饔茫豢鼓[瘤作用；綠色熒光蛋白鈍頂?shù)宥嗵强沟斩炯翱鼓[痛作用的研究InvestigationontheantiviralandanticanceractivitiesofpolysaccharidesfromSpirulinaplatensisAbstractInthispaper,theantiviralandanticanceractivitiesofpolysaccharidesfrom印irulinaplatensis(PSP)werereported．AmodifiedTCA(trichloroaceticacid)methodforextract

5、ionofPSPwasconductedinourexperiment，andthepurityofthepolysaccharidesreachestO92％．Thismethodismoreconvenient．rapidandeconomicalthanthetraditionalSevagmethod．AstandardstrainofherpessimplexvirustypeI(HSV-1，SM44strain)wasusedtoinvestigatetheantiviralactivitiesofPSPinvitroandinvivo．Invitroexp

6、erimentswerecardedoutinVerocells，firstlytheactivityofPSPagainstHSV-1wasprovedtObebetterthanacidovir,whichiSthemostwidelyusedantiviralagentinclinic．Thenvariousconcen仕ationsofPSP，wereappliedtodifferentstepsofHSV一1replicationcycle．virusinfectivity(TCID50)，cytopathiceffect(CPE)，plaqueforming

7、unit(PFU)，methylthiazolyltetrazolium(M1。r)methodandinsituhybridizationwereusedforestimatingtheinfluenceofthepolysaccharidesonthevirus．neinvitroresultsindicatethatsomeofthemechanismsofPSPagainstHSV一1maybeexplainedbytheinhibitoryeffectsonvirusadsorption,virusreplicationandH