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《蜂斗菜素抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖作用的分子機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterstudyonmolecularmechanismoftheanti—tumoreffectofpetasinonneuroblastomaByMingyangWangSupervisor：Prof．QiZhangMasterofPharmacySchoolofPharmaceuticalScienceApril2014原創(chuàng)性聲明IUllIIIIIIIIIIIIIIIIUIY2545042本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研
2、究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：日期：沙f5cj年』月多日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后
3、發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：日期：沙f仁年≤月摘要近年來，從天然產(chǎn)物中尋找有效的抗腫瘤活性成分不僅是腫瘤治療的研究熱點(diǎn)，而且也是當(dāng)前藥物界研究的熱點(diǎn)。蜂斗菜素是菊科蜂斗菜屬植物的有效活性成分之一。我們課題組在之前的研究中發(fā)現(xiàn)，蜂斗菜素對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N．SH細(xì)胞系的增殖有很高的抑制活性，對(duì)SH．SY5Y細(xì)胞系也有一定的增殖抑制活性。初步研究提示，蜂斗菜素對(duì)兩種細(xì)胞增殖抑制作用的分子機(jī)制并不相同。本研究著重于探討蜂斗菜素在兩種神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中發(fā)揮作用的分子靶點(diǎn)，為闡明蜂
4、斗菜素抗腫瘤作用的分子機(jī)制提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)蜂斗菜素作用后SK-N．SH和SH．SY5Y細(xì)胞中整體基因的表達(dá)變化情況；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)進(jìn)行基因芯片結(jié)果的驗(yàn)證；之后對(duì)篩選出的腫瘤相關(guān)基因egrl、ctgf春ogadd45a等進(jìn)行定量檢測(cè)，從基因水平進(jìn)一步推斷蜂斗菜素作用的分子靶點(diǎn)及可能機(jī)制。結(jié)果顯示，O．8gmol·L以的蜂斗菜素作用于SK-N．SH細(xì)胞8h后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞相比得到顯著差異表達(dá)基因15條，其中10條基因表達(dá)明顯上調(diào)，5條基因表達(dá)明顯下調(diào)；50pmol·L。1的蜂斗菜素作用于SH—SY5Y細(xì)胞8h后，實(shí)
5、驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞相比得到顯著差異表達(dá)基因90條，其中表達(dá)明顯上調(diào)的基因有48條，表達(dá)明顯下調(diào)的基因有42條。采用RT-qPCR技術(shù)對(duì)基因芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)了基因芯片結(jié)果的可靠性。從基因芯片結(jié)果中篩選出腫瘤相關(guān)的差異表達(dá)基因egrl、ctgf和gadd45a，進(jìn)一步檢測(cè)在蜂斗菜素作用不同時(shí)間后，SK-N．SH細(xì)胞和SH．SY5Y細(xì)胞中此3個(gè)基因的表達(dá)變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蜂斗菜素均能瞬時(shí)上調(diào)egrl基因的表達(dá)，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，在SK-N．SH細(xì)胞中，蜂斗菜素的作用逆轉(zhuǎn)為抑制egrl基因的表達(dá)，而在SH．SY5Y細(xì)胞中，其表達(dá)水平則恢復(fù)至正常；對(duì)于cⅣ基因來說，蜂斗菜素作用
6、8h后可引起其在SK．N．SH細(xì)胞中表達(dá)水平下調(diào)，而在SH．SY5Y細(xì)胞中由于該基因表達(dá)量相對(duì)較低而未檢測(cè)到；蜂斗菜素作用過程中，gadd45a基因在SK-N．SH細(xì)胞中的表達(dá)均較穩(wěn)定，不受藥物影響，相反，在SH—SY5Y細(xì)胞中，其表達(dá)量則在蜂斗菜素作用4h后持續(xù)升高。綜上所述，蜂斗菜素作用后，SK-N—SH細(xì)胞及SH—SY5Y細(xì)胞中均涉及多種T摘要類型基因的表達(dá)變化，這些表達(dá)變化顯著的基因包括抑癌基因、細(xì)胞周期蛋白基因、生長(zhǎng)因子及其受體基因、信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子基因、細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)相關(guān)基因和細(xì)胞死亡相關(guān)基因等。蜂斗菜素對(duì)SK-N．SH細(xì)胞的增殖抑制及周期阻滯作用可能
7、與其調(diào)控egrl基因及／或ctgf基因相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。另一方面，蜂斗菜素可能通過直接或間接誘導(dǎo)gadd45a基因的表達(dá)進(jìn)而引起細(xì)胞凋亡使SH．SY5Y細(xì)胞的增殖被抑制。關(guān)鍵詞：基因芯片蜂斗菜素神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖抑制分子機(jī)制RT-qPCRAbstractAbstractScanningeffectiveanti-tumorcompoundsfromnaturalproductshasbeenaresearchfocusintumortreatment，andalsoahotareaincurren
