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《利用現(xiàn)代生物技術(shù)方法創(chuàng)造玉米抗病種質(zhì)材料的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文利用現(xiàn)代生物技術(shù)方法創(chuàng)造玉米抗病種質(zhì)材料的研究姓名：孫曉麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：季良越20030601致謝衷心感謝我的導(dǎo)師季良越教授給我一個踏入分子生物學(xué)領(lǐng)域的機會，使我在短暫的三年中學(xué)習(xí)和掌握了部分植物基因工程的相關(guān)知識，領(lǐng)略到了生物科學(xué)的無限風(fēng)光。本論文從選題、試驗設(shè)計和實施到論文的撰寫和最終的定稿，點點滴滴無不凝聚了先生的大量心血。三年來，先生學(xué)為人師，行為世范，她坦蕩的胸懷，淡泊名利的品德，淵博的學(xué)識，嚴謹?shù)闹螌W(xué)態(tài)度都永遠是我學(xué)習(xí)的楷模和前進的動力。在整個論文的完成過程中得到了導(dǎo)師組呂德彬、崔黨群、陳彥慧、吳建
2、宇、李玉玲、劉宗華等幾位教授以及羅福和、胡彥民、湯繼華、季洪強等老師的無私幫助，在此表示深深的謝意。感謝中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所的周廣和老師、陳定虎博士在整個試驗過程中給予的悉心指導(dǎo)和熱情幫助。感謝河南省農(nóng)科院易明林老師在基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)方面所提供的方便和大力支持。感謝北京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院的張根發(fā)老師和河南省農(nóng)科院陳占寬研究員對論文進展的關(guān)心及提出的諸多寶貴意見和建議。感謝研究生處和農(nóng)學(xué)院各位老師對我的鼓勵、幫助和支持。我的同寢好友殷全玉、孫軍利、鄭霞在學(xué)習(xí)和生活中給予我許多啟示和照顧；同門師兄弟鄧世政、付金峰、實習(xí)學(xué)生張燕、練云以及屈鵬、屈娟師傅在試驗中提供了諸多幫
3、助，在此獻上我最誠摯的謝意，并祝你們工作順利、生活幸福。最后，我要深深地感謝我的父母、兄嫂和朋友多年來在學(xué)習(xí)、生活上給予的巨大鼓勵、理解和支持以及付出的艱辛勞動。親人們的愛是我堅強的后盾和力量源泉，使我能夠順利地完成學(xué)業(yè)。愿將人間最美好的祝福奉獻給你們。孫曉麗2003年6月摘要為了解決玉米各種病毒病特別是矮花葉病的危害問題，本研究以87—1自交系(R)，87—1×綜3(G)，鄭22×87—1(H)，鄭22×HI(A×B)(T)，4個基因型的玉米幼胚誘導(dǎo)的愈傷組織為受體，利用基因槍介導(dǎo)法將美洲商陸抗病毒蛋白(Pokeweedantiviralprotein，PAP)基
4、因和抗卡那霉素篩選基因以l：1比例共轉(zhuǎn)化導(dǎo)入玉米胚性愈傷組織。愈傷組織在轉(zhuǎn)基因前后分別在高滲培養(yǎng)基里處理4和16個小時，然后在含有G418濃度為25—40mg．L1的篩選培養(yǎng)基上連續(xù)篩選三代，將存活下來的抗性愈傷組織分化得到了18株再生植株。提取再生植株的DNA經(jīng)PCR擴增、Southern雜交以及點雜交檢測，結(jié)果均顯示其中有5株呈陽性反應(yīng)，信號強烈，說明PAP基因確實已經(jīng)轉(zhuǎn)入由抗性愈傷組織再生出的這些植株的基因組中，轉(zhuǎn)化頻率為27．80％。以鄭22×87一l(H)；87—1×鄭22(L)：A188×鄭22(N)；鄭22×A188(0)；綜31自交系(K)；A188
5、自交系(C)6個組合的玉米幼胚誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚性愈傷組織為篩選材料，選用國內(nèi)報導(dǎo)較多的玉米莖腐病病原菌一禾谷鐮刀菌(Yusariumgraminearum)在玉米粒培養(yǎng)基上培養(yǎng)產(chǎn)生的水溶性毒素為選擇壓力，毒素活力鑒定采用毒索對玉米種子萌發(fā)的影響以及對玉米胚根、胚芽的影響兩種方法，經(jīng)過鑒定發(fā)現(xiàn)毒素處理的玉米種子與對照相比較萌發(fā)率低，胚根和胚芽都受到較大抑制，可以確定所提取的毒素是有活性的。篩選方法采用了兩種程序，程序一為：篩選濃度由低到高：10％一20％一30％；程序二：30％一30％一30％，經(jīng)過連續(xù)三代的篩選，獲得抗毒索愈傷組織，篩選過程中發(fā)現(xiàn)兩種篩選程序在最初兩次篩
6、選時有明顯的不同，但到第三次穩(wěn)定之后二者效果不是很明顯。分化培養(yǎng)抗性愈傷組織，得到大量再生植株，移栽到大田只有少部分花期相遇，能夠自交結(jié)實，收獲種子。將得到的R。代種子進行苗期抗病性鑒定，Hh。。Nh。、Nh。一。的子代對莖腐病抗性提高不大，而其它植株與對照苗相比，小苗抗性強，其病株率、病情指數(shù)都大幅度低于對照值，而且發(fā)病遲，危害輕，表現(xiàn)出水平抗性的特點。而且，來自不同再生植株的后代，抗性有一定的差異，這說明，通過連續(xù)的篩選，得到的抗性愈傷組織可能一部分是生理適應(yīng)，表現(xiàn)在后代抗病性不強，而另一部分后代抗病性明顯提高的可能就是抗性突變體。同時也說明細胞水平的抗病性與植
7、株水平的抗病性不完全對應(yīng)，但這種突變體篩選途徑是切實有效的。關(guān)鍵詞：玉米共轉(zhuǎn)化PAP基因G418抗性愈傷組織莖腐病篩選突變體抗病性鑒定第一章PAP基因轉(zhuǎn)化玉米的研究1文獻綜述1．1植物抗病毒基因工程研究進展植物病毒病一直是造成農(nóng)業(yè)生產(chǎn)損失最大而對其又缺乏非常有效的防治的一類主要病害。50年代以來，由于作物復(fù)種指數(shù)提高，引種頻繁，多種病毒病的流行日益嚴重，許多重要病毒，如水稻矮縮病毒(RDV)，小麥黃花葉病毒(WYMV)，大麥黃矮病毒(BYDV)，玉米矮花葉病毒(MDMV)，馬鈴薯Y病毒，馬鈴薯X病毒(PVX)，太豆花葉病毒(SMV)，煙草花11一r病毒(TMV)
