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《大鼠腦片培養(yǎng)研究GSK3β對tau蛋白AD樣異常磷酸化的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、華中科技大學碩士學位論文大鼠腦片培養(yǎng)研究GSK-3β對tau蛋白AD-樣異常磷酸化的作用姓名：盧芬申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：劉聲遠2003.5.1坐主壁絲盔蘭塑鯊墮蘭墮堡!：型壅生蘭!!壘墨大鼠腦片培養(yǎng)研究GSK一3B對tau蛋白AD一樣異常磷酸化的作用摘要廠(神經原纖維纏結(NeurofibrillaryTangle，NFT)是阿爾茨海默病(nzheimer’Sdisesse，AD)的兩大病理特征之一，異常過度磷酸化的tau蛋白是NFT的主要成分，而受累神經元內蛋白激酶與蛋白磷酸酯酶的失衡又是tau蛋白異常過度磷酸化的主要
2、生化機制。體內和體外的實驗都證明糖原合酶激酶一3(Glycogensynthasekinase一3，GSK一3)在AD的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用；—皋研究應用磷酯酰肌醇三磷酸激酶(phosphatidylinositol3-kina螽，P13K)及蛋白激酶B(ProteinkinaseB，PKB)的抑制劑渥曼青霉素(Wortmannin，WT)和蛋白激酶C(ProteinkinaseC，PKC)的抑制劑GF一109203X(GFX)與培養(yǎng)的大鼠海馬組織切片孵育，在離體水平上調GSK一3D(GSK一3的一個亞型)，造成蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶系統(tǒng)失衡，經免
3、疫印跡與免疫組織化學技術檢測的實驗結果顯示：單用GFX組PHF—l位點和Tau一1磷酸化水平分別增高29％和21％，單用婀組分別增高46％和41％，而二者聯(lián)合應用組分別增高68％$U55％：異常過度磷酸化的tau蛋白電泳遷移速度減慢；聯(lián)合應用wT和GFX則出現(xiàn)類似AD患者腦中NFT樣細胞；若同時應用GSK一3D的特異性抑制劑氯化鋰(Lithiumehloride，LiCl)，則可消除上述的tau蛋白過度磷酸化的作用；tau蛋白的過度磷酸化與細胞活性降低正相關。這些研究結果表明：GSK一3B在腦組織切片水平受P13K／PKB和PKC的雙重調節(jié)，激活的G
4、SK一3B在tau蛋白磷酸化中起關鍵作用；在離體水平通過抑制Pt3K／PKB途徑激活了GSK一3$，發(fā)生tau蛋白的異常過度磷酸化，以及tau蛋白的集聚現(xiàn)象。本研究首次在腦片水平闡明了GSK一3B對tau蛋白在AD樣磷酸化中的作用，為AD研究建立了腦片模型。關鍵詞：阿爾茨海默??；tau蛋白；過度磷酸化；渥曼青霉素；GFX氯化鋰蘭生!!墊墨堂型鯊墮蘭墮．堡．!：型塑生望!!!鯊Researchfortheroleofglycogensynthasekinase一3BonAlzbeimer—ljketauhyperphosphorylationincul
5、turedratbrainSliceNeurofibri1Iarytangles(NFT)areoneoftheneuropathologicalhallmarks0fA1zheimer’Sdisease(AD)andabnormallyhyperphosphory[atedtauisthemajorproteinofNFT．Itiswidelyrecognizedthattheimbalanceinproteinkinaseandproteinphosphatasearethemechanismsofphosphorylationoftau．Stu
6、diesinyjtroandjnv／VObothsuggestthatderegulationofglycogensynthasekinase一3(GSK一3)activityinneuronsarekeyfeatureinAD．TheroleofGSK一3B(oneisoformsofGSK一3)ontauphosphorylationinculturehippocampusSlicewasexaminedbyincubatingheslicewithWortmannin(WT)，aninhibitotofphosphatidyli[IOSitol
7、3-kinase／ProteinkinaseB(P13K／PKB)andGFl09203X(GFX)，aninhibitorofproteinkinaseC(PKC)．Westernblotandimmunohistochemistryaswellas32Pradio-labelingassayUSingspecifiCsubsiratewereusedtoinvestigatetheregulationofGSK一3pacttvityandtheAD—liketauhyperphosphorylation．Theresultsdemonstrate
8、dthatphosphorylationoftauwaselevated29％and46％atPHF～Isi
