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1、槐米中蘆丁和槲皮素含量測定方法研究進展作者：王立軍 曹曉鋼 于剛 牛小花【關鍵詞】槐米 蘆丁 槲皮素 含量測定 綜述 槐米中的主要有效成分是蘆丁和槲皮素等黃酮類物質。蘆丁具有廣泛的藥理活性,能維持及恢復毛細管的正常彈性,增強其抵抗力,防止血細胞凝聚,臨床用于防治腦溢血、高血壓等心腦血管疾病[1]；槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗過敏、抗菌、抗病毒等多方面的藥理作用[2]。我國是蘆丁的出口國,槐米是提取蘆丁的主要原料,2005版《中華人民共和國藥典》(一部)規(guī)定,槐米中總黃酮的含量(以無水蘆丁計)不低于20%,無水蘆丁(C27H30O16)不少于1
2、5%[3]。因此,研究槐米中蘆丁和槲皮素含量測定方法對槐米質量控制有很重要的意義。現(xiàn)將槐米中蘆丁和槲皮素的含量測定方法綜述如下。 1分光光度法 1.1等吸收紫外光度法 李氏等[4]用等吸收紫外光度法同時測定槐米中的蘆丁和槲皮素。分別配制槲皮素和蘆丁的單組分標準溶液,測定它們在波長240～38016nm的吸光度,經(jīng)過粗選和細選,分別找出槲皮素和蘆丁的等吸收波長λ1247、λ2266、λ3340、λ4370。然后分別配制一系列濃度的蘆丁、槲皮素溶液,測定其在波長247nm和266nm、波長340nm和370nm處的吸光度,計算其對應的吸光度
3、差值,分別作出ΔA-C校準曲線及線性回歸方程。用上述方法測定槐米中蘆丁和槲皮素的含量。將槐米的乙醇提取物配制成一系列不同濃度的甲醇溶液,在波長247nm和266nm、340nm和370nm下分別測定其吸光度值,并計算吸光度差值,據(jù)回歸方程計算蘆丁和槲皮素的濃度。然后分別計算樣品中蘆丁和槲皮素的含量,6個樣品中蘆丁平均含量為80.60%,RSD＝1.61%；槲皮素平均含量為9.49%,RSD＝1.53%?！ ?.2熒光光度法 利用鋁與槲皮素形成熒光配合物,姚氏等[5]采用熒光光度法測定槲皮素。文獻中選擇測定條件為激發(fā)波長365nm,發(fā)射波長4
4、98nm,測定溫度為室溫,溶液酸度控制為pH＝6,選用2×102mol/L鋁標準溶液。在10mL比色管中,加入一定量的槲皮素標準溶液,再加入三氯化鋁標準液1mL,用95%乙醇稀釋至刻度,振搖均勻后放置15min,用1cm比色皿,在960型熒光光度計上測其熒光強度,同時做空白試驗,繪制工作曲線。將槐米乙醇提取物用蒸餾水溶解,過聚酰胺柱,待水解液過完后,再用蒸餾水洗柱3次,用95%乙醇洗柱,洗至醇洗液加三氯化鋁無熒光反應。合并乙醇洗液,測其中樣品的含量。方法加標回收率97.8%～100.0%,RSD＝2.58%(n＝6)。16 1.3催化動力學
5、光度法 在鹽酸介質中,微量蘆丁對重鉻酸鉀氧化靛紅的反應有明顯的催化作用,崔氏等[6]建立了測定蘆丁的催化動力學光度法。取2只10mL具塞刻度試管,其中一只加入一定量的蘆丁標準液,另一只不加,再分別依次加入0.60mL0.10%靛紅溶液、0.90mL0.30mol/L鹽酸溶液、1.10mL0.010mol/LK2Cr2O7溶液,然后加水至刻度,搖勻,反應10min后,以水為參比,用1cm比色皿于611nm波長處測量非催化體系的吸光度A0和催化體系的吸光度A并計算ΔA。將槐米乙醇提取液按實驗方法進行測定,同時做標準加入回收實驗。方法的線性范圍是
6、0.003～0.09μg/mL和0.10～100μg/mL,檢出限為0.003μg/mL,回收率為95.5%～102.5%(n＝4)?！ ?.4固相萃取-分光光度法 李氏等[7]采用固相萃取-分光光度法聯(lián)用來測定中藥槐米中蘆丁含量。準確配制不同濃度的蘆丁標準溶液,用移液管準確量取溶液置于100mL量瓶中,加甲醇至5mL體積,加0.30mL5%NaN02溶液,放置6min；再加0.30mL10%Al(NO3)3溶液,放置6min；再加4.00mL4%NaOH溶液,最后加甲醇至刻度,搖勻。室溫放置15min后,在紫外分光光度計上于λ＝50016
7、nm處測定吸光度,處理數(shù)據(jù)得回歸方程。樣品測試：先用5mL石油醚洗柱,再用5mL甲醇洗柱,最后加水5mL洗柱；加槐米甲醇提取溶液上柱,每2mL為單位收集流出液。UV測定：以第7～8mL流出液測試并進行數(shù)據(jù)處理得原藥材樣品中蘆丁的含量為29.1%。將標準品溶液及原藥材樣品液定量混合后依上法進行分析,平均回收率為99.98%,RSD＝0.012%(n＝3)?！ ?.5卡爾曼濾波光度法 王氏等[8]采用卡爾曼濾波光度法同時測定槐米中蘆丁和槲皮素含量。準確配制蘆丁、槲皮素甲醇標準溶液2個系列(每個系列3～5個)溶液。取上述系列標準溶液,在230～3
8、00nm范圍內,每間隔2nm測其吸光度,數(shù)據(jù)進行線性回歸處理,求出各自的吸光系數(shù)。取蘆丁、槲皮素濃度一定的模擬樣品分別測定5次,計算RSD分別為2.54%和1.54
