槐米中蘆丁及槲皮素的提取分離及鑒定

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1、實(shí)驗(yàn)二槐米中蘆丁及槲皮素的提取分離及鑒定槐米為豆科植物槐（SophorajaponicaL．）的未開放花蕾。味苦性涼、具清熱涼血、止血之功。常用于治療多種出血癥：腸風(fēng)便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等?；泵壮３刺繎?yīng)用?；泵椎闹饕瘜W(xué)成分為蘆丁，其含量可達(dá)12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。蘆丁具有Vitp樣作用，可降低毛細(xì)血管脆性和調(diào)節(jié)通透性。臨床上用作毛細(xì)血管脆性引起的出血癥，常作為高血壓癥的輔助治療藥。[目的要求]1．通過蘆丁的提取與精制掌握堿酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。2．掌握槲皮素

2、的制備原理及操作。3．熟悉紫外光譜在黃酮結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用4．通過蘆丁的結(jié)構(gòu)檢識(shí)，了解苷類結(jié)構(gòu)研究的一般程序和方法。[實(shí)驗(yàn)原理]蘆?。╮utin）：C27H30O16·3H2O，淺黃色針狀結(jié)晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（無水物）。難溶于冷水（1：8000～10000），可溶于熱水（1：180～200），熱甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），熱乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；難溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于堿液。槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黃色結(jié)晶，mp313～314

3、℃（2分子結(jié)晶水），316℃（無水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；難溶于水、苯、石油醚等溶劑。6+鼠李糖+葡萄糖蘆丁為黃酮苷，分子中具有酚羥基，顯酸性，可溶于稀堿液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性質(zhì)進(jìn)行提取分離。利用蘆丁易溶熱水、熱乙醇，較難溶于冷水、冷乙醇的性質(zhì)選擇重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。蘆丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此進(jìn)行制備槲皮素。通過紙色譜及紫外光譜進(jìn)行黃酮及糖的鑒定。[實(shí)驗(yàn)內(nèi)容]一、蘆丁的提取分離及精制方法⑴槐米粗粉（50g）置1000ml燒杯中，加入5

4、00ml飽和石灰水，加熱，并維持pH8～9煮沸20分鐘，趁熱用脫脂棉濾過濾液藥渣用300ml飽和石灰水煮沸10分鐘，維持pH8～9趁熱濾過濾液藥渣（×）合并在60℃～70℃下用濃HCl調(diào)pH至4～5靜置，抽濾沉淀低溫（80℃）干燥，稱重。按1：200的比例加水，加熱使溶解，趁熱濾過濾液靜置，抽濾，減壓干燥，計(jì)算收率蘆丁精制品6方法⑵利用蘆丁在冷熱溶劑中的溶解度不同進(jìn)行提取分離?；泵状址鄯兴蠓?～10分鐘，反復(fù)2次趁熱濾過水提取液藥渣放冷沉淀析出（粗蘆?。崴亟Y(jié)晶或乙醇重結(jié)晶蘆丁結(jié)晶二、槲皮素的制備稱取精品蘆丁1g置250ml燒瓶中加2%H2S

5、O4200ml加熱回流1小時(shí)放冷，靜置，抽濾酸性濾液沉淀中和水洗兩次，干燥乙醇重結(jié)晶中性濾液稱重，計(jì)算收率濃縮黃色細(xì)針狀結(jié)晶濃縮液（槲皮素）（供糖的PC鑒定）三、檢識(shí)反應(yīng)1．蘆丁的定性反應(yīng)取蘆丁適量，加乙醇使溶解，分成三份供下述試驗(yàn)用：(1)鹽酸鎂粉試驗(yàn)：取樣品液適量，加2滴濃HCl、再酌加少許鎂粉，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)，并逐漸出現(xiàn)紅色至深紅色。(2)鋯-枸試驗(yàn)：取樣品液適量，然后加2％ZrOCl26的甲醇溶液，注意觀察顏色變化，再加入2％枸椽酸的甲醇溶液，并詳細(xì)記錄顏色變化。(3)α-萘酚-濃硫酸反應(yīng)：取樣品液適量，加等體積的l0％α-萘酚乙醇溶液

6、，搖勻，沿管壁緩加濃硫酸，注意觀察兩液界面的顏色。2．蘆丁的UV(1)鑒定試劑的配制①甲醇鈉溶液：取0.25g金屬鈉，切碎，小心加入色譜甲醇10ml中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。②三氯化鋁溶液：取1g無水三氯化鋁，小心加入色譜甲醇20ml中，放置24小時(shí)后全部溶解即得。③醋酸鈉：用無水粉末醋酸鈉。④⑤硼酸飽和溶液：取無水硼酸，加入適量色譜甲醇、制成飽和溶液。（上述貯備液可放置六個(gè)月）（2）蘆丁溶液的配制精密稱取蘆丁純品0.5g，用甲醇適量溶解至50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。（3）光譜的測定①甲醇光譜：取樣品液置石英杯中，至200～50

7、0nm內(nèi)進(jìn)行掃描，重復(fù)一次，觀察紫外光譜。②甲醇鈉光譜：取樣品液置石英杯中，加入甲醇鈉溶液3滴后，立即測定，放置5分鐘后再測一次。③三氯化鋁光譜，在盛有樣品液的石英杯中，加入三氯化鋁6滴，放置1分鐘后進(jìn)行測定。測定后加入3滴鹽酸溶液（鹽酸：水＝1：1）再進(jìn)行測定。④醋酸鈉光譜：取樣品液約3ml，加入過量的無水醋酸鈉固體，搖勻（杯底剩有約2mg的醋酸鈉），加入醋酸鈉后兩分鐘內(nèi)測定，5分鐘到10分鐘后再測定一次。63．蘆丁及槲皮素的色譜支持劑：中速層析濾液（5×20cm）展開劑：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上層樣品：自制槲皮素的乙醇溶液自制蘆丁的乙

8、醇溶液對(duì)照品：槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的乙醇溶液顯色劑：三氯化鋁乙醇溶液噴霧4．糖的紙色譜檢識(shí)支持劑：中速層析濾紙（5×20cm