槐米中蘆丁的提取、分離和鑒定

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1、槐米中蘆丁的提取、分離和鑒定張景清（廣西科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院廣西柳州545006）1.摘要:本實(shí)驗(yàn)以槐米為原料，采用堿提酸沉法從槐米中提取蘆丁，使我們學(xué)習(xí)和掌握提取和精制蘆丁的具體作方法，并了解如何對(duì)黃酮類化合物鑒定。該方法提取率高達(dá)26.3%，對(duì)提取的蘆丁做了薄板識(shí)別及紫外分析，并與標(biāo)準(zhǔn)品做對(duì)比，結(jié)果表明提取的蘆丁與標(biāo)準(zhǔn)品的純度大致相等。2.引言蘆丁,亦稱蕓香苷,廣泛存在于植物界中,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的含蘆丁的植物有50種以上,其中以槐米和蕎麥葉中含量最高,可作為大量提取蘆丁的原料。蘆丁屬于黃酮類化合物,在心腦血

2、管疾病的治療上起到了舉足輕重的作用,具有VP樣作用。有助于保持毛細(xì)血管正常彈性,同時(shí)還有抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。其臨床效果肯定,副作用少,同時(shí)也是一種植物原料藥[1]。黃酮類化合物的提取方法較多主要是依據(jù)其溶解性及酸性。黃酮類化合物的提取方法一般有：①熱水提取法②醇提法③堿提酸沉法④系統(tǒng)溶劑提取法本實(shí)驗(yàn)堿提酸沉法通過(guò)從槐米中提取蘆丁，使我們學(xué)習(xí)和掌握提取和精制蘆丁的具體操作方法，并了解如何對(duì)黃酮類化合物鑒定。3.實(shí)驗(yàn)原理槐米中含蘆丁、槲皮素、皂苷、白樺、酯醇等多種成分。蘆丁是其主要成分，含量為16%-25%

3、。蘆丁屬于黃酮類化合物，結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)酚羥基，呈酸性，苷元為槲皮素，糖基為蕓香糖。蘆丁為淺黃色細(xì)小針狀結(jié)晶，95-97℃脫水，熔點(diǎn)314℃，可溶于沸乙醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、丙酮，不溶于石油醚和水。蘆丁可溶于堿液中，呈黃色酸化后又析出，故可采用堿提酸沉法得到蘆丁產(chǎn)品。然后利用在冷水中不溶，在熱水中微溶的溶解度差精制，可獲得純度高的微細(xì)針狀結(jié)晶，最后利用蘆丁、槲皮素、及糖的性質(zhì)予以鑒定。4.實(shí)驗(yàn)部分4.1實(shí)驗(yàn)藥品槐米（市售），氧化鈣AR（西隴化工股份有限公司），鹽酸AR（西隴科學(xué)有限公司），四硼酸鈉AR（廣東省臺(tái)

4、山市化工廠），甲醇AR（天津市大茂化學(xué)試劑廠），三氯甲烷AR（成都市科隆化學(xué)品有限公司）,氯仿（分析純，成都市科龍化工試劑廠），乙醇（分析純）4.2實(shí)驗(yàn)儀器JJ200電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠），SHZ-D（III）循環(huán)水式多用真空泵（河南愛(ài)博特科技發(fā)展有限公司），ZNLC-GS130*60智能磁力攪拌器（河南愛(ài)博特科技發(fā)展有限公司），薄層色譜展開(kāi)缸，紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）4.3實(shí)驗(yàn)步驟4.3.1蘆丁的提取方法一：稱取槐米10.0g，在研缽中稍加研碎后，置于500ml燒杯中，加入250ml水，加

5、熱攪拌下添加石灰乳，保持PH=8-8.5。加熱至80℃左右時(shí)加入硼砂0.2g，攪拌下加熱至沸20min，稍置，傾出上清液過(guò)濾。對(duì)殘?jiān)?00ml水重復(fù)提取一次。棄去殘?jiān)喜V液。用10%鹽酸調(diào)PH為5，靜置過(guò)夜，過(guò)濾，用少量蒸餾水洗2-3次，抽干即可得蘆丁粗品。方法二：稱取槐米10.0g，在研缽中稍加研碎后，置于500ml燒杯中，加入沸蒸餾水250ml，加熱攪拌下繼續(xù)加熱至沸30min，稍置，趁熱傾出上清液，以脫脂棉過(guò)濾。對(duì)殘?jiān)?00ml水重復(fù)提取一次。趁熱過(guò)濾，合并濾液。用1%鹽酸調(diào)PH為5，靜置過(guò)夜，過(guò)

6、濾，用少量蒸餾水洗2-3次，抽干即可得蘆丁粗品。4.3.2蘆丁精制取粗品2.0g轉(zhuǎn)入燒杯中，加入適量蒸餾水（350ml左右），加熱至沸添加適量蒸餾水，使之剛好溶解完全，趁熱抽濾，靜置過(guò)夜，使晶體析出。抽濾，用少量水洗2次，在70-80℃下干燥結(jié)晶，即可得精制蘆丁。4.3.3蘆丁的薄板識(shí)別將實(shí)驗(yàn)所得的蘆丁用甲醇溶解，并與標(biāo)準(zhǔn)蘆丁的甲醇溶液分別點(diǎn)在聚酰胺板上，用氯仿：甲醇（5:4）展開(kāi)。紫外燈下觀察熒光，噴2%三氯化鋁乙醇溶液后再觀察熒光變化，計(jì)算Rf值。4.3.4紫外光譜的鑒定配置標(biāo)準(zhǔn)蘆丁的甲醇溶液測(cè)其之外光譜。

7、取0.5g研磨好的槐米粉末，加10ml甲醇，在超聲波下提取5min，過(guò)濾，濾液作為蘆丁樣品溶液。向比色皿中滴加1-2滴蘆丁樣品溶液，并加入適量甲醇溶液，測(cè)其紫外光譜，并與標(biāo)準(zhǔn)蘆丁的紫外光譜作對(duì)比。5.結(jié)果與討論5.1結(jié)果5.1.1提取率方法一抽濾后得到了1.45g蘆丁樣品，提取率為14.5%；方法二抽濾后得到了2.63g蘆丁樣品，提取率為26.3%；5.1.2蘆丁收率取2.0g粗產(chǎn)品進(jìn)行重結(jié)晶，最后得蘆丁精品1.8g，收率為90%5.1.3蘆丁識(shí)別及Rf值得測(cè)定①號(hào)板：a標(biāo)=1cm，a樣=2cm，b=5.1cm

8、。則Rf標(biāo)=0.196，Rf樣=0.392②號(hào)板：a標(biāo)=1.5cm，a樣=2cm，b=4.5cm。則Rf標(biāo)=0.333，Rf樣=0.4445.1.4紫外光譜的鑒定由紫外譜圖看出，兩峰的位置及形狀基本一致，可定性的判斷為同一種物質(zhì)。5.2討論在使用方法一提取蘆丁時(shí)，收率較低。是因?yàn)樵趬A提時(shí)pH調(diào)的不夠高，影響蘆丁的提取率；在酸沉?xí)r調(diào)的不夠低，降低了蘆丁的析出。比較1號(hào)和2號(hào)的薄板識(shí)別，溶