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《晚期糖化終末產物對大鼠成骨細胞凋亡的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、中文摘要晚期糖化終末產物對大鼠成骨細胞凋亡的影響摘要目的：骨質疏松是一種老年性疾病，其發(fā)病與多種因素仃火。人量實驗表明：‘類被稱做晚期糖化終術』^：物(AdvancedGlycosylationEndProducts。AGEs)的物質在骨質疏松發(fā)病過程中起了重要作用。AGEs是體內糖的醛基或酮基與蛋白質等自由氨基經過非酶促反應形成的具有特征性熒光的化合物，正常情況下是機體組織重建和內環(huán)境穩(wěn)定所需，過多積累則引起許多病理改變。臨床研究發(fā)現(xiàn)，血透患者的非酶糖化產物AGEs修飾的13：．微球蛋白(AGEs．p2M)沉淀部位多發(fā)生骨質疏松。在骨質疏松大鼠動物模型中，
2、其皮質骨內AGEs增多、I型膠原蛋白含量顯著減少，凋亡的成骨細胞增多。我教研室以往實驗也發(fā)現(xiàn)，低濃度AGEs能促進成骨細胞增殖、分化及I型膠原mRNA的表達，高濃度AGEs促成骨細胞增殖作用減弱、抑制成骨細胞分化及礦化結節(jié)的形成。由此我們推測，高濃度的AGEs可能通過促成骨細胞凋亡，而使成骨細胞數(shù)量減少，而其解偶聯(lián)作用又導致破骨細胞活性相對增強，進而引起骨形成減少及骨質疏松的發(fā)生。有研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)的上皮細胞中，高濃度的AGEs確能通過一氧化氮合酶系統(tǒng)造成的氧化應激而導致細胞損害。在骨的有機質中，90％為I型膠原；它是決定骨骼彈性和韌性的物質基礎，也是成骨細
3、胞附著和骨鹽沉積的場所。許多研究表明，I型膠原基岡型與骨質疏松和骨密中文摘要度有密切關系。I型膠原含有大量自由的氨基，是非酶糖化的好發(fā)部位，其糖化形成AGEs必將引起其功能的改變，進而影響骨基質中的成骨細胞，從而影響骨形成。細胞凋亡，又稱為程序性細胞死亡(ProgrammeCellDemh，PCD)是有核細胞在一定條件下，啟動自身內部機制，主要通過激活內源性DNA內切酶引起細胞的自然死亡，它是細胞維持自穩(wěn)狀態(tài)而具有的一種生理性自殺機制。隨著生化和分子生物學技術的發(fā)展，其在骨組織的發(fā)生、演變、骨修復、骨重建等方面的意義有了較深入的研究。對細胞凋亡的研究已清晰地
4、證明：caspase的蛋白酶級聯(lián)反應控制著凋亡的發(fā)生與發(fā)展。多種凋亡因素引發(fā)一系列信號轉導過程最終引起細胞凋亡的主要執(zhí)行者caspase．3的活化而導致細胞凋亡的發(fā)f卜。方法：本研究在以往相關實驗的基礎上，利用體外葡萄糖與牛血清白蛋白孵育制得的AGE．BSA模擬骨基質中的AGEs，以不同濃度加入到成骨細胞培養(yǎng)體系，相同濃度的牛血清白蛋白(BSA)作對照，作用72d,N后，用Hoechst33258染色觀察成骨細胞形態(tài)，脫氧核苷酸末端轉移酶介導的DNA原位末端標記技術(TI肥L試驗)及瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA斷裂情況、熒光分光光度法側caspase3活性、免疫
5、組織化學的方法檢測細胞內誘導型‘氧化氮合酶(iNOS)表達，旨在探討AGEs與成骨細胞凋亡的量效關系，以求進一步理解骨質疏松的發(fā)病機理，并為以后的預防和治療提供理論依據(jù)。結果：1．熒光染色成骨細胞形態(tài)觀察中文摘要Hoechst33258染色后，胞體呈彌散均勻熒光，著色較淡；5001．te,／mlAGE．BSA組與對照組成骨細胞胞體著色較淺，呈彌散均勻熒光。1500la∥mlAGE．BSA與2500u∥mlAGE．BSA組成骨細胞胞核染成強藍綠色。相同濃度各BSA對照組成骨細胞胞體呈彌散均勻熒光，著色較淡。2．DNAladder試驗500u∥mlAGE—BSA
6、組與500ug／mlBSA組的成骨細胞DNA電泳后僅為一條距加樣孔很近的大分子條帶。1500ug／mlAGE—BSA與2500u∥mlAGE—BSA組的成骨細胞均出現(xiàn)明顯的凋亡梯狀DNA條帶。相同濃度各對照組無DNAladder出現(xiàn)。3．脫氧核苷酸末端轉移酶介導的DNA原位未端標記(TUNEL)試驗TUNEL染色后，經顯微鏡觀察，5001．tg／mlAGE．BSA組成骨細胞著染率較低，與對照組比較無顯著差異。1500u∥mlAGE—BSA組及2500la∥mlAGE．BSA組成骨細胞著染率較高，與對照組有顯著差異(P<0．001，P<0．001)。該結果與D
7、NA斷裂情況相符。4．caspase．3活性500u∥mlAGE—BSA組成骨細胞caspase．3活性較對照組明顯降低(P<0．叭)。1500ue,／mlAGE．BSA鰣i及2500u∥mlAGE—BSA組成骨細胞caspase．3活性較對照組明顯升高(P<0．001，P<0．001)。5．iNOS含量各組AGE—BSA組成骨細胞iNOS染色陽性數(shù)均高于柑同濃度對照組，且iNOS表達與TUNEL著染率相符。中文摘要結論：1．低濃度晚期糖化終末產物可抑制成骨細胞的凋亡，高濃度則促進成骨細胞凋亡。2．晚期糖化終末產物使成骨細胞誘導型一氧化氮合酶表達增加，并可能
8、通過促其過多表達而引起成骨細胞凋亡增加．關鍵詞：晚期
