星形細(xì)胞瘤中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究

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1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文星形細(xì)胞瘤中微衛(wèi)星不穩(wěn)定性研究姓名:鄭秀玨申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):神經(jīng)外科指導(dǎo)教師:劉偉國2003.5.1錯(cuò)、短太掌硬壹:褥究生章敬避交鼙彩纓熬瘸孛擻墨墨攀穗定性磷變鬻江大學(xué)滾學(xué)院菠淤院辯耩篇二氍黼神經(jīng)辯輯滯秀玨咎師劉偉國教授棗交攘簧微衛(wèi)星怒廣泛存在于原梭及真核纓胞基因綴中的簡單串聯(lián)燕復(fù)DNA序列,并其脊高度霧怒性,變異率掇低,馭讞德爾菇駐性方式遺傳。人類許多腫瘤的發(fā)生、菠溪與墓爨鍾裝霆擻翌爨DNA逮蕊夔不豫窀建搿ie羚燃瓣馘a繇轅鞋霉,MSD及張成等位基因的雜含性缺必(Lossofhetemzygosity,LOH)張

2、關(guān),某些特異染佼體微衛(wèi)星的LOH多聞時(shí)佯有該位點(diǎn)上的抑绱熬因失瀚,并譙腫瘤的繳生發(fā)腿過程孛茨簿重要佟蘑。誨多鼓凌瞧黲囊麓鑫蠱舔、藜囊癌、黑琶素瘺、獲羲霪、瓣膜癭、謄審經(jīng)母緦瞧癬哮l均發(fā)域商廣泛MSI現(xiàn)羰。現(xiàn)鼓汪實(shí)囊煉奏梭緞腿中巷在錯(cuò)配修復(fù)基因系統(tǒng)(Mi8matc柵娜ai瑁enesystem-MMR),參與贏制后的修復(fù),通過漤豫DNA臺(tái)濺騖饕溪浚豢簿DNA簦裁筠穩(wěn)定淫蠢輟囊鞋;蘑纛蠢豁懿N撩*IR系絞中主要毽掭6靜罄因,肆hMLHt、hMSH2、hMSH3、hPMSt、hPMS2瀨hMSH6e當(dāng)MMR.基闌功能失活(如撼闊突變、啟動(dòng)子隰甲基化

3、),就不能修復(fù)DNA復(fù)制蓬羲孛懿繕潺,曩導(dǎo)蒙澈銎鏊DNA黧復(fù)壽魏辯不穩(wěn)囊鏈,表蕊為MSt耪LOHa匿避;瓣膠袋臻中擻翌星蠶穩(wěn)定縫磅巍饔劈予認(rèn)識(shí)駁袋瘞菱受、菱曩襁糕,熨好揭示膠質(zhì)瘤發(fā)瞞分子瓣礎(chǔ)。/姜驗(yàn)材料和儀器乙{,實(shí)浚糖簍:蓬黟纓藏瘞番零寒叁溪二囂麓禱羥努餐手術(shù)黎零,蠢蹲彀意卷舞辯菠夫掌蕊圭研究盎擎篷詫交簿靜黥盤臻洚委露戇織DNA瓣爨。讖熬:繁囊酶K、T鍵DNA蘩窘懿等魏蠡丹麥DAKO公司。氯仿、異戊簿、乙醇、醋酸鈉等購自杭州長征化學(xué)試劑廠。2.實(shí)驗(yàn)墳器;疆溫藕:寧液江南彼囂廠。PeR電泳倪和越逮離心機(jī):北京六~紋鼗廠。紫舞努競斃渡莰;主海

4、勢凝寢囂廠。實(shí)驤方法l。DNA懿獺掇①組織標(biāo)本DNA的抽撼:將紐熾碾碎艏騷白酶K消化,50’C孵宵12—18小薅。等髂蔽酚,鬣羹,辯發(fā)簿箍攝DNA,酪黢鑣、己囂流漣,"rE溶辯,4X2豫襻。②盎液櫞本DNA躲撻提:蛋蕊懿K消惚,鼴℃拳港中l(wèi)小時(shí)。黲,氯捷,暴戊醇抽提DNA,禿水乙醇凝醋酸鈉i冗淀,TE(3-羥甲基.氨撩乙烷m藝二氨網(wǎng)藝酸)漆察,辱℃瀑套+羔擻翌星PCR擴(kuò)蠼選用D9S171、D9S165、D9S54、APOC2、D19S112、HRC等6個(gè)微衛(wèi)星惋點(diǎn)速{亍狳溺?;樟寇盌NA雩{饕凈蕊疑GenomeDataBase(http:#

5、gdbwww,gdb.org]gdb)查獲;孳l貔潦串辯懿上海綏糙耋贛爨合蕊。PCR夏嫩體系灸:50mmol/LKCL,10mmol/L惴8。CI,l,Smol/LMgCh,200umol/LdNTPs,模板DNA200ng,上下游零;裙各50pmot,TaqDNA聚臺(tái)酶1U熱承至弱引L。PCR反應(yīng)霧數(shù)為:夸硨℃交蝗5rain,然囂迸入蠖瑟(瓣℃50◇,囂℃60秒,?2℃60穢,)莛3S令溪環(huán),鍛后72℃延伸10min,4℃保存。3。瑟襤聚丙烯酰胺凝肢電泳凝薈s警滾整聚蠢矮蘸黢凝獲,漿PCR擴(kuò)璐產(chǎn)臻{蟄程,與等葵聯(lián)魏變遂熬釋緩沖波混臺(tái)磁于9

6、5'(2變性torain,冰,b驟冷,取15ul煺一上樣。400V恒壓電溶。報(bào)攢指示劑二甲苯青的位置荊斷產(chǎn)物泳動(dòng)位濺。一≈~瀕漫大學(xué)灝±嵇怒生舉毽論文4。鍛染鼴色褥帶羧熬玻璃凝努剩羯10%五蘩霸l%磷酸楚凌5rain,蒸讒農(nóng)添洗,耀0,2%磷酸鑷溶液染色10min,蒸餾永漂洗蓐用1.5%NaOH、O..4%甲醛溶液翌截至帶鍪瀵密,照耀懲予縫聚分撰。5。臻萊粼蘸分聿拜電濠圖譜,MSI定為虢瘸綴織楣瓣予正鬻繳織密黼條蒂熟數(shù)量及大小豹激變;LOH為黔癌蒺一等經(jīng)鎣飄象帶瀵必或耱?qū)γ芏葴p少50%戳上。凝有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)弱饜SPSSl0.0FORWINDOW

7、S統(tǒng)計(jì)較釋包避蠢簸璦。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)所采糯6個(gè)微重星筏煮靜染穩(wěn)體位餮及莓l耨侉嗣顯表1。46捌壁形緞藏癌的MSl分靜子裘鵝:共有22例毒在MSt(47。寒%);LOH共弩l《翻(30。毒%),其中l(wèi)~ll緩3鍘(6.5%),1101V級l{惻(23。9%),爨體位點(diǎn)參覓裘2,可覓脾瘤的黲瞧程度離{氐與LOH的發(fā)生育鬣萋差辯(P妁.05),盛19號染恕髂的LOH與瓣癭豹惡蠛程度糍骶之闖氌毒在疆蓉差羚(P

8、發(fā)生有鼎罄差異(x2:4.7569)19礙染色體的LOH與腫瘤懟讎程度之間存在鼴贛差異(x2司.2姻9)繾埝MSl與臻形細(xì)胞瘸關(guān)系豁切,LOH與型形細(xì)胞瘸惡性進(jìn)展有關(guān)。{《{綴每

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