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1、中山大學博士學位論文激活枯否細胞防治結直腸癌肝轉移的實驗研究姓名：張森申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：萬德森2003.4.20張森博士論文：激活枯否細胞防治結直腸癌肝轉移的實驗研究中文摘要激活枯否細胞防治結直腸癌肝轉移的實驗研究專業(yè)：腫瘤學(臨床型)博士生：張森導師：萬德森教授研究方向：大腸癌的綜合治療第一章：臨床研究中文摘要結直腸癌肝轉移臨床多因素分析目的：肝臟是結直腸癌轉移常見和好發(fā)部位，本部分探討結直腸癌肝轉移的I臨床相關因素，旨在為I臨床醫(yī)生判別結直腸癌肝轉移的危險病人提供較為可靠的依據(jù)。收集氣山墨科大
2、學腫瘤醫(yī)院1988～1997年間就診結直腸癌病例1312例，建立數(shù)據(jù)庫。畢擇性別、年齡、血型、病程、首發(fā)癥狀、腫瘤部位、腫瘤大小、術前合并癥、井發(fā)病、腫瘤大體、組織類型、病理分級、腸壁浸潤層次、淋巴結轉移共14項臨床因素，用Logistic回歸(spssl0．0統(tǒng)計軟件)進行單因素和張森博士論文：激活桔否細胞防治結直腸廊肝轉移的實驗研究中文摘要結果：單因豢分析鼴示性別、病程、腫瘤大體類型、組織類型、病理分級、腸壁浸溺鞫淋巴縫轉移瓣翳轉移騫影璃。多囂素分輯僅魏溺、瑟壁浸潤秘湃毫縫轉移對】j千轉移脊影響。結崴腸癌肝轉移男女
3、性別比為1．9：1，但柱病程(x2=-6．56,p>O．t0)、繾織類翟(x氈3。82，p>O．05)、靜癌大體類登(x2=0．40，p)O。75)、腫瘸侵犯層次(x2=I．04，p>O．75)、淋巴結轉移(x氈2．64，p)O．25)上無構成差異。肝轉移發(fā)生與腫瘤沒潤腸爨的層次瑩正相關(r=O．926，P=O．024)v翳轉穆發(fā)生與漤憋結轉移距離的遠近無關(r=o．748，P=O．252)。rV7結論：結妻瑟癌器轉移豹禳關遴素變簧騫鑲麓、耱瘸浸濾深度和游怨結轉移情況。男性結直腸癌患者更易發(fā)難肝轉移；腫瘤沒潤腸壁越深，
4、發(fā)生肝轉移的危險越大。舉齡、盎黧、病稷、首發(fā)瘢狀、腫瘤部位、腫瘤大小、術翦合并藏、并發(fā)瘸與肝轉移無關。繁二章：實驗磷究PART1：枯否細胞的分離培養(yǎng)與鑒定毽熬；肝臟懸腫瘤轉移的好發(fā)部位，而肝臟含有豐富的免疫細胞——枯磷細胞(KupfferCell，KC)。麓驕究稿褥細麓靜抗癌潘往，零蜜驗鏊程探討B(tài)AL8／c鼠枯否細胞的分離培養(yǎng)方法。張森博士論文：激滿枯否細胞防治結真腸癌肝轉移的實驗研究中文摘簧方法：選熙健康攘性8一lO周齡BALB／c鼠，麻酹無菠取Jl手，注射沖洗去斑并剪去部分結締組織，小玻璃瓶中剪碎肝組織，加入0．0
5、4％的EDTA和0．05％鏈霉蛋囪簿E溶液，交耱輕輕歡黲潰紜。苓銹鋼然網濾避，懲0。004％Dnasel瓣1640液清洗細胞液，加Tris一氯化胺溶解紅細胞。30％--70％Percoll梯度離心，10％滯s鼯壁培養(yǎng)4一醴洗去；≥辯整綢穩(wěn)。逶遙辯院傣內、體井孝騫香縮脆眷噬墨水和體外裕噬聚苯乙烯乳珠(1atexbeads，D1．1lIm)簽定枯否細胞。廠＼{結果：Kupffer細胞的得率為7．57_+1．92X106個／鼠肝，即6．15X106個／g，貼蹙攀熱40。18％。懲0。496螽黔藍染色鑒定，纓魏移活率在9溉毯土
6、，吞噬蒸定發(fā)現(xiàn)Kupffer細胞的純度可達90％。貼壁Kupffer細胞的形態(tài)多樣，可見不規(guī)則，多邊形，多囊落越，典型貔麓形及多角形。俸舞壤葬梧否綴囂睦存溪2周囂采冤霉蠢眷噬功能：V、／結論：酶消化法縮合梯度離心和貼壁培養(yǎng)楚分離BALB／c鬣桔否細胞的可靠方法，必避一步實驗孝『下了基礎。P矗解2：小鼠結腸癌細胞株的傳代培養(yǎng)及活性鑒定目的：CT26是一檬建轉移豹冷甄繚耢癌纓貔稼(colontumor26)，蔻零諜逛下一步實驗需簧，確定CT26的部分性質和傳代培養(yǎng)保存方法。方法；①分壹接歐打、0．5％胰酶消化、0．04％E
7、DTA消化芹H0．25％胰酶與0．02％藏豢蔣圭論文：激滔戇否維薤醅治縮藏腸癌掰轉移麴安驗謬}寵孛文接簧EDTA混合液消化組，觀察CT26的消化方法。②在％魏叛上按1×104／：E接靜CT26纓瑰，每天計數(shù)，共l瘸，謗算倍增時間。(§)BALB／c鼠接種CT26細胞，觀察小鼠和／或腫瘤嫩長情況。④癌組織秘羧承提取CT26緩魏，體捧培莠鼴察壤簇能力釋再j湊猙鼴察致瘞健。⑤常規(guī)用DM$O在一80℃凍存與復蘇，觀察增殖能力和致瘤性。／、f結果：．》-／CT26的消化接種比較發(fā)現(xiàn)，直接吹打法簡便易行，對細胞無明最損傷，如爨纓底
8、瀵純，霹趣0。04％EDTA游證3min。CT26在24h瘛遴入豢數(shù)裳長絮，嫠壤時間為2．1天nCT26皮下或腹腔按種清沽級BALB／c鼠均有致瘤性，并出現(xiàn)肝轉移·接種的腫瘸均能提取出數(shù)量巨大的CT26，并能傳代培養(yǎng)，增嫩分裂。常規(guī)凍存復蘇爨縫傳我培莽莠袁致瘩墼}過。結論：零聚突楚鼴豹CT26能鬻羧簧霞壤莠勢輿騫致瘞健，等囂始文獻
