宏基因組學(xué)研究根結(jié)線蟲病害土壤的細(xì)菌生態(tài)特征

宏基因組學(xué)研究根結(jié)線蟲病害土壤的細(xì)菌生態(tài)特征

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1、云南大學(xué)二零壹叁屆碩士學(xué)位論文宏基因組學(xué)研究根結(jié)線蟲病害土壤的細(xì)菌生態(tài)特征Accessingthesoilmetagenomeforanalyzingtheimpactofmeloidogyneinshapingbacterialpopulation研究生:陳春燕導(dǎo)師:黃曉瑋研究員專業(yè):微生物學(xué)方.向:分子生物學(xué)資助項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目:30970065云南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要根結(jié)線蟲(Meloidogynespp.)是一種主要的植物寄生性線蟲,入侵植物后,導(dǎo)致植物根部形成巨大細(xì)胞和根結(jié),也使得植株更容易感染其他病害,因此每年給農(nóng)業(yè)造成嚴(yán)重的損失,云南的煙草種植業(yè)也深

2、受其害。根結(jié)線蟲、土壤微生物、作物三者間構(gòu)成線蟲病害土壤中小型的一個(gè)生態(tài)系統(tǒng),其中根結(jié)線蟲和土壤微生物二者之間有著密不可分的關(guān)系。深入研究線蟲病害土壤中根際微生物種群多樣性及結(jié)構(gòu)的變化,對(duì)揭示土壤中微生物在根結(jié)線蟲入侵過程中的生態(tài)功能、更好地防治該病害具有重要價(jià)值,但目前尚缺乏相關(guān)的研究報(bào)道。為克服土壤中絕大部分微生物不可培養(yǎng)的弊端,本研究以采集自云南省玉溪和大理兩個(gè)地區(qū)的根結(jié)線蟲病害煙草的根際土壤為研究對(duì)象,以鄰近地塊健康煙草的根際土壤為實(shí)驗(yàn)對(duì)照,采用宏基因組技術(shù),構(gòu)建16SrDNA文庫(kù),分析比較了兩類土壤中細(xì)菌的多樣性和種群結(jié)構(gòu)組成,探討根結(jié)線蟲與細(xì)菌種群之間的關(guān)系,

3、獲得的主要結(jié)果如下:1.成功構(gòu)建了4份根際土壤的16SrDNAV3區(qū)文庫(kù),分析了土壤樣品中的細(xì)菌多樣性和豐富度。通過比較同一地區(qū)的兩份土壤樣品文庫(kù)的Alpha多樣性,我們發(fā)現(xiàn)根結(jié)線蟲的入侵使得根際土壤中細(xì)菌的豐富度和多樣性明顯下降。2.通過計(jì)算不同地區(qū)之間的Beta多樣性和繪制Venn圖譜,我們得知根結(jié)線蟲的入侵使得同一地區(qū)間共有的細(xì)菌種類減少,卻使不同地區(qū)間共有的細(xì)菌種類增加了,即縮小了地區(qū)間的細(xì)菌種類差異。3.對(duì)樣品中的細(xì)菌種類進(jìn)行比較分析,發(fā)現(xiàn)根結(jié)線蟲的入侵改變了原本土壤中細(xì)菌的組成和分布情況。變形菌門和放線菌門依然是主要的細(xì)菌門,但是厚壁菌門更多得分布于患病土壤中

4、,且差異顯著。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象主要源于芽孢桿菌數(shù)量的顯著增加。4.細(xì)菌的分離純化實(shí)驗(yàn)以及生測(cè)實(shí)驗(yàn)表明:純化分離得到32株不同的細(xì)菌,大多數(shù)屬于芽孢桿菌屬,且在根結(jié)線蟲病害煙草的根際土壤中,分布著更多的具有殺線蟲活性的芽孢桿菌。上述結(jié)果揭示了根結(jié)線蟲與根際細(xì)菌之間的密切關(guān)系,為進(jìn)一步研究根結(jié)線云南大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要蟲的入侵機(jī)制、以及防治該病害的生態(tài)學(xué)基礎(chǔ)提供了理論依據(jù)。本論文創(chuàng)新點(diǎn)總結(jié)如下:1.首次運(yùn)用宏基因組的方法分析比較了患病土壤中的細(xì)菌區(qū)系與健康土壤中的細(xì)菌區(qū)系的異同點(diǎn)。、2.首次系統(tǒng)地揭示了根結(jié)線蟲的入侵對(duì)根際細(xì)菌的種群分布的影響。關(guān)鍵詞:根結(jié)線蟲病害:根際

5、細(xì)菌:宏基因組:細(xì)菌多樣性:種群變化云南大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractPlantparasiticnematodes,especiallyMeloidogyne.spp,widelyexistasanintractableproblemwithintheworldwideforitsseriousdamageofcrop.Giantcellsandrootknotformaftermeloidogyneinvading,andthisdamagewillconsequentlycauseotherfungiandbacteriadiseases.Amicro—ecolo

6、gicalsystemfonnedamongmeloidogyne,rhizosphericbacteriaandplants.Meantime,meloidogynehasacloserelationshipwithrhizosphericbacteria,andbothofthemconstitutetwoofthemostimportantcomponentsinnematodiasissoilniches.Soithasimportantvaluetoexplorerhizospheremicrobialdiversityandpopulationchangeti

7、nnematodiasissoil,whichcanalsorevealtheecologicalsignificanceofmicrobeintheprocessofmeloidogyneinvading.However,theweakknowledgeontherelationshipbetweenMeloidogyneandrhizosphericbacteriathathampersourunderstandingforecologicalfunctionofthemicrobialfloraintheenvironm

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