土壤食細菌線蟲的分離和富集培養(yǎng)方法

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1、南京農(nóng)業(yè)大學學報　2002,25(2):71～74JournalofNanjingAgriculturalUniversity土壤食細菌線蟲的分離和富集培養(yǎng)方法李輝信,陳小云,胡鋒(南京農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境科學學院,江蘇南京210095)摘要:從小麥根際土中分離得到一種能取食B1和B2兩種細菌的土壤食細菌線蟲,并在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基上富化培養(yǎng)成功。經(jīng)鑒定該線蟲為原小桿線蟲屬(Protorhabditissp.),B1為假單胞菌屬(Pseudomonassp.),B2為醋桿菌屬(Acetobactersp.)。用牛肉膏蛋白胨細菌培養(yǎng)基培養(yǎng)B1和B2兩種細菌時,細菌無

2、多糖產(chǎn)生,線蟲不能取食細菌而生長繁殖;當用馬鈴薯蔗糖真菌培養(yǎng)基培養(yǎng)B1和B2兩種細菌時,細菌分泌豐富的多糖,線蟲生長繁殖較好。多糖是線蟲生長繁殖的重要外部環(huán)境。關鍵詞:土壤食細菌線蟲;富化培養(yǎng);多糖中圖分類號:S15411　　　文獻標識碼:A　　　文章編號:1000O2030(2002)02O0071O04Isolationandenrichmentculturingofasoilbacterial2feedingnematodeLIHui2xin,CHENXiao2yun,HUFeng(CollegeofResourcesandEnvironmentalSc

3、iences,NanjingAgricUniv,Nanjing210095,China)Abstract:AsoilbacterivorousnematodefeedingonbacteriaB1andB2wasisolatedfromrhizospheresoilofwheatandculturedonpotatosucroseagarmedium(PSA).ThenematodewasidentifiedasProtorhabditissp.;B1andB2wereidentifiedasPseudomonassp.andAcetobactersp.,re

4、spectively.B1andB2didn’tsecretepolysaccharoseonbeefpolypeptoneagarmedium(BPA)andthenematodedidn’tgrowonBPAmediumwithB1andB2,whileB1andB2secretedpolysaccharoseonPSAmedium.ThenematodegrewverywellonPSAmediumwithB1andB2.Polysaccharoseconstitutesanimportantexternalenvironmentfornematodeg

5、rowth.Keywords:soilbacterial2feedingnematode;enrichmentculturing;polysaccharose土壤食細菌線蟲是土壤自由生活線蟲(free2livingnematodes)的主要類群,往往占土壤線蟲總數(shù)的[1～3]60%～80%,在根際土壤中甚至可達90%以上。國內(nèi)外近年的研究結果表明,土壤食細菌線蟲雖然對有機物質分解的直接作用較小,但因其個體小、世代短、代謝活性高,可通過其自身代謝周轉釋放出有效養(yǎng)分,特別是與微生物之間存在競爭、牧食等相互作用,因而對有機物質分解、養(yǎng)分循環(huán)和能量轉[4～8]化等生態(tài)

6、學過程起著重要作用,是土壤肥力形成和保持的活躍因子。目前國內(nèi)在此領域的研究還很薄弱。這些研究的基礎是目標線蟲的獲取,但關于土壤食細菌線蟲的富化培養(yǎng)方法未見報道。本研究的目的是獲取可培養(yǎng)的土壤食細菌線蟲及可被線蟲取食的微生物,并了解微生物及其代謝與線蟲生長的關系,從而建立有效的線蟲富化培養(yǎng)方法。1　材料與方法111　土壤食細菌線蟲的分離和表面消毒[9]　　土壤線蟲用Baermann漏斗法分離,即在漏斗中放入線蟲濾紙,將新鮮小麥根際土樣(黃棕壤)置于其上,用水淹沒土樣,24h后通過漏斗下方的乳膠管收集線蟲樣本。在解剖鏡下根據(jù)線蟲的口器特-1征挑取食細菌線蟲,將其轉

7、入滅菌的離心管中,用消毒液處理20min,3000r·min離心5min,除去上　　收稿日期:2001O05O31　　基金項目:國家自然科學基金資助(39570134;39970419)　　作者簡介:李輝信(1964),博士,副教授,主要從事土壤生態(tài)和土壤動物研究。E2mail:huixinli@njau.edu.cn·72·　　南　京　農(nóng)　業(yè)　大　學　學　報　　　　　　　　　　　　　　第25卷-1清液,再用無菌水反復清洗5次。每次清洗時充分震蕩,3000r·min離心5min,棄去上清液。消毒劑用011%的硫酸鏈霉素和01002%的放線菌酮的混合液。112　

8、土壤細菌的分離、純化-6-7-8將小麥