超排卵周期生長分化因子9和生長分化因子9B表達及調(diào)控研究

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1、分類號：R711密級：內(nèi)部2年學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位囹?qū)I(yè)學(xué)位口0學(xué)校代碼：1062學(xué)號：20081078學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又洱醬科矢崢￥IANJINMEDICALU樹lVERSI"博士學(xué)位論文DOCTORALDISSERTATIoN論文題目：超排卵周期生長分化因子9和生長分化因子9B表達及調(diào)控研究TITLETheresearchofGDF一9GDF一9Bexpressionandregulationinsuperovulationcycle一級學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：婦產(chǎn)科學(xué)論文作者：王會妍指導(dǎo)教師：糜若然導(dǎo)師組成員：張云山天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一一年五月學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲

2、明：所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：皇篁蘭牢日期：2。11年5月1。日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密囹，在—三年解密

3、后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密口。(請在相對應(yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：皇：紐日期：2。11年5月1。日導(dǎo)師簽名：雄日期：2。··年5月·。日天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要輔助生殖技術(shù)(AI盯)尤其是體外受精．胚胎移植(IVF．ET)的開展和成熟是治療不孕、不育癥最為行之有效的手段?？刂菩猿怕咽荌VF—ET妊娠率逐步提高的原因之一，然而不同個體的卵巢對外源性促性腺激素(Gn)有不同的反應(yīng)。卵巢低反應(yīng)的發(fā)生率約為12％～30％，以超排卵后獲卵數(shù)目少和血雌二醇(E2)峰值低為特征，常導(dǎo)致治療周期取消和低妊娠率，甚至部分患者只能選擇贈卵。因此如何評估和改善超排卵周期卵巢

4、低反應(yīng)是IVF工作中亟待解決的難題。生長分化因子．9(GDF．9)、GDF一9B作為卵源性生長因子近年來被發(fā)現(xiàn)可能是卵泡發(fā)育過程的關(guān)鍵調(diào)控因子，二者隸屬轉(zhuǎn)化生長因子．B(TGF．p)家族，通過自分泌及旁分泌方式作用于卵母細胞、顆粒細胞及卵泡膜細胞，調(diào)節(jié)卵巢局部細胞的分化、增殖，調(diào)控優(yōu)勢卵泡的形成及卵母細胞的成熟。研究GDF．9、GDF．9B表達與超排卵卵巢低反應(yīng)的關(guān)系及調(diào)控機制，為臨床改善卵巢功能、提高獲卵率提供理論依據(jù)。第一部分GDF-9、GDF-9B表達與卵巢低反應(yīng)的關(guān)系目的：研究超排卵周期GDF．9、GDF．9B表達與卵巢低反應(yīng)的關(guān)系，探討二者是否參與卵巢低反應(yīng)的發(fā)生機制。

5、方法：選取行ⅣF．ET的患者70例，采用常規(guī)長方案進行超排卵，依據(jù)取卵時獲得平均直徑>14ram的卵泡數(shù)分為卵巢低反應(yīng)組21例，正常反應(yīng)組25例，高反應(yīng)組24例。應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real．timePCR)技術(shù)檢測卵巢不同反應(yīng)組患者卵泡壁顆粒細胞和卵丘顆粒細胞GDF．9mRNA、GDF．9BmRNA的表達，分析GDF．9和GDF．9B與卵巢低反應(yīng)的關(guān)系，以及二者與超排卵獲卵數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果：卵巢不同反應(yīng)組患者年齡、不孕年限、基礎(chǔ)FSH、E2、LH水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>O．05)。卵巢低反應(yīng)組卵泡壁顆粒細胞和卵丘顆粒細胞的GDF．9mRNA相對表達量低于正常反應(yīng)組

6、及高反應(yīng)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

7、段插入真核表達載體pcDNA3．1(+)，構(gòu)建重組真核表達載體pcDNA3．I(+)／GDF．9；重組質(zhì)粒以脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染人胚腎293T細胞誘導(dǎo)表達，免疫親和層析法純化目的蛋白。結(jié)果：陽性克隆質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定和測序結(jié)果證明pcDNA3．I(+)／GDF．9重組真核表達載體構(gòu)建成功，Westernblotting確證純化重組GDF．9蛋白成功獲得。第三部分重組蛋白GDF-9對小鼠超排卵的影響目的：通過體內(nèi)動物模型觀察重組蛋白GDF．9對小鼠超排卵的影響，深入分析GDF．9對卵泡發(fā)育