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《氯沙坦對(duì)D半乳糖致衰老大鼠腎臟的保護(hù)作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、氯沙坦對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠腎臟的保護(hù)作用【摘要】目的探討血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑氯沙坦對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠腎臟的保護(hù)作用及可能機(jī)制。方法將36只大鼠隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組、衰老模型組及氯沙坦治療組，每組12只。D-半乳糖連續(xù)腹腔注射制備亞急性衰老大鼠模型。組織學(xué)檢查腎組織病理改變，免疫組化方法檢測(cè)腎組織中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)、纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)的水平。結(jié)果組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)模型組腎小球體積增大，分布稀疏，不同程度的局灶節(jié)段性腎小球硬化，腎小管管腔擴(kuò)大，灶狀小管萎縮，間質(zhì)纖維化;治療組腎組
2、織改變與模型組相比有所減輕。免疫組化半定量分析結(jié)果顯示治療組CTGF、PAI-1的水平較模型組明顯減低(P<0.05)。結(jié)論氯沙坦可以抑制CTGF、PAI-1的表達(dá)，抑制細(xì)胞外基質(zhì)的積聚，減輕腎間質(zhì)纖維化，從而減輕衰老，發(fā)揮腎保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】氯沙坦;衰老;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子;纖溶酶原激活物抑制物-1 腎臟是人體最重要的器官,其衰老對(duì)機(jī)體的影響尤為重要。目前導(dǎo)致腎臟衰老的機(jī)制還不完全清楚〔1〕，在眾多調(diào)控因素中腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)起著重要作用。衰老腎臟的病理改變及尿蛋白的增加都可能與腎臟局部血管緊張
3、素升高相關(guān)。氯沙坦為血管緊張素Ⅱ(Ang8Ⅱ)Ⅰ型受體拮抗劑，可阻斷AngⅡ與其Ⅰ型受體結(jié)合，從受體水平拮抗其生物學(xué)效應(yīng)，從而降低腎小球毛細(xì)血管內(nèi)壓，改善腎血流動(dòng)力學(xué)異常，緩解早期的高濾過(guò)、高灌注狀態(tài)，減少尿蛋白，保護(hù)腎功能。本實(shí)驗(yàn)觀察了氯沙坦對(duì)D-半乳糖致大鼠衰老模型的影響,觀察大鼠腎臟的形態(tài)變化，并測(cè)定大鼠腎組織CTGF和PAI-1的表達(dá)，以探討氯沙坦延緩腎臟衰老的作用機(jī)制?！ ?材料與方法 1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象成年SD大鼠36只，體重250~300g(由遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)?！ ?.2衰老模型建立大鼠每日
4、腹腔注射D-半乳糖(100mg/kg體重)，連續(xù)42d，形成糖代謝紊亂所致的亞急性衰老模型?！ ?.3實(shí)驗(yàn)分組36只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、衰老模型組及氯沙坦治療組，每組12只。氯沙坦治療組每天予氯沙坦40mg/kg灌胃。其他兩組每天予等量生理鹽水灌胃?！ ?.4實(shí)驗(yàn)試劑兔抗CTGF多克隆抗體、小鼠抗大鼠PAI-1抗體(武漢博士德有限公司);SP工作液試劑盒(北京中山公司);氯沙坦鉀(商品名：科素亞，杭州默沙東制藥有限公司)。8 1.5組織學(xué)檢查腎組織常規(guī)組織脫水、透明、浸蠟、包埋。4μm石蠟切片用于HE、Mas
5、son染色，光鏡下觀察?！ ?.6免疫組化檢測(cè)(ABC法)4μm的石蠟切片脫蠟入水，加3%的過(guò)氧化氫，CTGF、PAI-1以微波修復(fù)抗原，以蛋白阻斷液阻斷20min，滴加一抗，4℃過(guò)夜，然后加入二抗，室溫20min，再加鏈霉素-生物素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物工作液，室溫20min，用DAB顯色，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，最后以蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片，PBS替代一抗作陰性對(duì)照。用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件進(jìn)行計(jì)算機(jī)讀片，以對(duì)陽(yáng)性染色區(qū)域的積分光密度值做半定量分析?！ ?.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，用SPSS11.0統(tǒng)
6、計(jì)軟件分析，各組間進(jìn)行組間單因素方差分析?！ ?結(jié)果8 2.1大鼠腎組織標(biāo)本病理改變正常對(duì)照組大鼠腎小球分布密集，呈圓形或橢圓形，外周規(guī)整，腎小囊的囊腔正常，腎小管的管腔規(guī)整;衰老模型組大鼠腎小球體積增大，腎小球分布稀疏，不規(guī)整，不同程度的局灶節(jié)段性腎小球硬化，腎小囊的囊腔明顯擴(kuò)大，腎小管管腔擴(kuò)大，上皮細(xì)胞變性而且大小不均，灶狀小管萎縮，間質(zhì)纖維化，及少量單核細(xì)胞浸潤(rùn);氯沙坦治療組大鼠腎小球數(shù)量與衰老模型組相比明顯增多、腎間質(zhì)纖維化程度明顯減輕，腎小管灶狀上皮細(xì)胞空泡變性，無(wú)萎縮 和代償性肥大，未見(jiàn)間質(zhì)水腫，見(jiàn)圖
7、1?！ ?.2免疫組化指標(biāo)測(cè)定見(jiàn)圖2，圖3。CTGF在正常對(duì)照組腎間質(zhì)區(qū)無(wú)或僅有微量表達(dá)，在模型組腎間質(zhì)可見(jiàn)較多的散在的片狀分布，以髓質(zhì)區(qū)最為明顯，而治療組較模型組明顯減輕(P<0.05)。PAI-1僅在正常對(duì)照組大鼠小管上皮細(xì)胞胞漿有圖1各組大鼠腎臟結(jié)構(gòu)比較(HE，×100)圖2各組腎間質(zhì)CTGF的表達(dá)(DAB，×200)圖3各組腎間質(zhì)PAI-1的表達(dá)(DAB，×200)少量表達(dá)。模型組大鼠主要表達(dá)在腎小球壁層上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及系膜細(xì)胞，小血管的內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞。而治療組大鼠腎小球及小
8、管上皮細(xì)胞表達(dá)比模型組有所減輕。免疫組化半定量分析結(jié)果可見(jiàn)，衰老模型組腎組織CTGF和PAI-1的積分光密度明顯高于對(duì)照組，而氯沙坦治療組則明顯降低，表明在衰老模型組腎組織CTGF和PAI-1的表達(dá)明顯增高，而氯沙坦可以降低衰老大鼠腎組織的CTGF和PAI-1的表達(dá)水平，見(jiàn)表1。表1腎間質(zhì)CTGF、PAI-1的表達(dá)水平 3討論8 腎臟衰老是機(jī)體衰老的重要
