AFP特異性siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及其在胃癌基因治療中的實(shí)驗(yàn)研究

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1、山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文符號(hào)說(shuō)明縮略詞英文全稱中文全稱AFPalpha-fetoprotein甲胎蛋白APGCalpha-fetoprotein-producinggastric甲胎蛋白陽(yáng)性胃癌carcmomaDEPCdiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMSodimethylsulfoxide二甲基亞砜ds礎(chǔ)姐doublestrandedRNA雙鏈RNA.FU97AFP-producinggastricadenocarcmomacell特異表達(dá)AFP的人胃腺癌細(xì)胞株mRNAmessengerribonucleicacid信使核糖核酸CDNAcomplementa

2、ryDNA脫氧核糖核酸dNTPdeoxyribonucleosidetriphophate脫氧核苷酸三磷酸bpbasepair堿基對(duì)RNAribonucleicacid核糖核酸LBluria-bertani細(xì)菌培養(yǎng)基MTT3-(4,5一dimethylthiazol-2-y1)-2,5-dipenyl四唑鹽(噻唑藍(lán))terazoliumbromidePBSbufferedsaline磷酸鹽緩沖液phosphatePTGSpost-transcriptionalgenesilencing轉(zhuǎn)錄后基因沉默RN』蚯RNAinterferingRNA干涉siRNAsmallRNA小干擾RNAi

3、nterferingshRNAsmallhairpinRNA小發(fā)夾RNAELISAenzyme—linkedimmunoabsorbemassay酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)7EBt11idiunbromide溴化乙錠PCRploymerasechairreaction多聚鏈?zhǔn)椒磻?yīng)GAPDHglyceraldehydesphosphatedehydrogenase磷酸甘油醛脫氫酶VEGFvascul掣endothelialgrowthfactor血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子MVDthemicrovesseldensity微血管密度RISCRNA—inducedsilencingcomplexRNA誘導(dǎo)沉默復(fù)

4、合體7學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明,所呈交的學(xué)位論文系在導(dǎo)師指導(dǎo)下本人獨(dú)立完成的研究成果。文中引用他人的成果,均已做出明確標(biāo)注或得到許可。論文內(nèi)容未包含法律意義上已屬于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他學(xué)位申請(qǐng)的論文或成果。學(xué)位論文知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品,知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院。山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院享有以任何方式發(fā)表、復(fù)制、公開(kāi)閱覽、借閱以及申請(qǐng)專利等權(quán)利。本人離校后發(fā)表或使用學(xué)位論文或與該論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí),署名單位仍然為山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院。論文作者簽名:銎墮:堡導(dǎo)師簽名:日期:皿玉鯊日日期:壘Z年』月2_ff_8Ij山

5、東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文AFP特異性siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建及其在胃癌基因治療中的實(shí)驗(yàn)研究研究生;郟雁飛指導(dǎo)教師:汪運(yùn)山中文摘要甲胎蛋111(alpha-fetoprotein,AFP)I自被發(fā)現(xiàn)以來(lái),作為一個(gè)胎兒異常和腫瘤的標(biāo)志物,在臨床診斷和病情監(jiān)測(cè)等方面發(fā)揮了重要作用,其在臨床中的意義受到人們的充分研究。然而甲胎蛋白的生理學(xué)功能及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用受到的關(guān)注卻相對(duì)較少,只是在最近十年中人們才意識(shí)到甲胎蛋白在腫瘤生長(zhǎng)中的調(diào)節(jié)作用并開(kāi)始實(shí)驗(yàn)研究。甲胎蛋白陽(yáng)性胃癌(alpha-fetoprotein--producinggastriccarcinoma,APOC)是一種

6、特殊類型的胃癌,特征是AFP升高和及腫瘤組織表達(dá)AFP升高,其臨床病理學(xué)特征與普通型胃癌有較大不同。更易發(fā)生肝轉(zhuǎn)移和早期淋巴道轉(zhuǎn)移,具有明顯的侵襲性和惡性生物學(xué)行為,發(fā)病率約占胃癌的5.1*/'o-15%I“。由于APGC患者就診時(shí)多有轉(zhuǎn)移,常不能手術(shù)根治切除,切除后也易復(fù)發(fā),故尋找新的治療藥物和治療手段乃當(dāng)務(wù)之急。RNA干擾(RNAinterference,RNAa)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)和發(fā)展起來(lái)的一門新興的在轉(zhuǎn)錄水平上的基因阻斷技術(shù),是一種雙鏈RNA(double-strandedRNA,dsRNA)分子在mRNA水平上關(guān)閉相應(yīng)序列基因的表達(dá)或使其沉默的過(guò)程。目前,在某些病毒性疾病的治療

7、研究中己取得了一定的進(jìn)展,在基因功能研究和基因治療方面也己顯示了巨大的應(yīng)用前景。鑒于體外合成的小干擾RNA(smallinterferingRNA,siRNA)費(fèi)用高,持續(xù)作用不能保證,我們首先在體外構(gòu)建了能在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)發(fā)夾狀shRNA的載體,再將載體轉(zhuǎn)染入細(xì)胞內(nèi),在FU97細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄出siRNA從而引發(fā)基因沉默,觀察其對(duì)FU97細(xì)胞AFP基因表達(dá)的抑制作用及其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及凋亡誘導(dǎo)作用。目的:本研究旨在利用RNAi技術(shù),構(gòu)建能在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)AFPshRN

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