激素誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨及成脂分化的實(shí)驗(yàn)研究

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1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文激素誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨及成脂分化的實(shí)驗(yàn)研究姓名：曹亞偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：骨外科指導(dǎo)教師：吳學(xué)建20060515塑型查堂!竺!旦堡主蘭些笙苧一一一?—主苧i!蘭激素誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨及成脂分化的實(shí)驗(yàn)研究研究生曹亞偉導(dǎo)師吳學(xué)建鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨外科河南鄭州450052摘要臨床上非創(chuàng)傷性股骨頭壞死(Osteonecrosisoftllefcmoralhead，ONFH)多見(jiàn)，致殘率高。其中，腎上腺糖皮質(zhì)激素【簡(jiǎn)稱激素】引發(fā)的ONFH已占第一位，臨床組織學(xué)及病理學(xué)研究證明：激素性O(shè)NHI的早期病理變化是股骨頭骨髓內(nèi)造血組織減少，脂肪組織增多，骨小梁

2、內(nèi)骨細(xì)胞數(shù)目減少。已有實(shí)驗(yàn)證明激素能夠誘導(dǎo)動(dòng)物骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化，并引起脂質(zhì)代謝異常，繼而發(fā)生股骨頭壞死。這種現(xiàn)象與激素性0NFH的病理變化相似，提示激素性O(shè)NFH可能與激素直接誘導(dǎo)BMSCs分化成脂肪細(xì)胞有關(guān)。以上結(jié)論都是通過(guò)體外培養(yǎng)動(dòng)物BMSCs得出上述結(jié)論，由于人和動(dòng)物間種屬的區(qū)別，通過(guò)人的BMscs體外分離培養(yǎng)來(lái)研究激素性O(shè)Nlm發(fā)病機(jī)制的文獻(xiàn)尚未見(jiàn)到報(bào)道。我們?cè)诜蛛x獲取原代人的BMsCs的基礎(chǔ)上，傳代后加入地塞米松進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用分子生物學(xué)檢測(cè)方法，觀察地塞米松對(duì)hBMsCs的影響，深入探討激素性O(shè)NFH的發(fā)病機(jī)制。材料和方法骨髓細(xì)胞來(lái)自鄭州大學(xué)一附院臨床自愿提

3、供者。在髂前上棘處取髂骨骨髓，通過(guò)密度梯度離心，貼壁分離培養(yǎng)，對(duì)原代的hBMscs進(jìn)行傳代后，隨機(jī)分為兩組，加入濃度為10·7M的地塞米松的作為實(shí)驗(yàn)組，并以不加地塞米松的作為對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞5天。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT_PCR)技術(shù)，檢測(cè)細(xì)胞中成脂轉(zhuǎn)錄因子(adipogenictranscriptionfactor)PPARymRNA和骨鈣素(Osteocalcin)mRNA的表達(dá)。鄭州大學(xué)2006屆碩士畢業(yè)論文中文摘要結(jié)果1．通過(guò)密度梯度離心，貼壁分離培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)在體外培養(yǎng)得到hBMSCS，經(jīng)傳代后得到第2代hBMsCS。2．用lO。7M濃度的地塞米松處理細(xì)胞后5天，通過(guò)

4、凝膠成像掃描系統(tǒng)作PcR半定量分析，顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中PPA聊mRNA呈高表達(dá)，而對(duì)照組中PPA聊mRNA呈低表達(dá)，兩組間差異有顯著性(P<0．05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中OsteocalcinmRNA呈低表達(dá)，而對(duì)照組中0steocalcinmRNA呈高表達(dá)，兩組間差異有高度顯著性(P

5、細(xì)胞分化減少，從而導(dǎo)致股骨頭骨髓內(nèi)脂肪堆積，成骨細(xì)胞和造血細(xì)胞減少，骨內(nèi)壓升高，最終發(fā)生股骨頭壞死。關(guān)鍵詞激素人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄PcR成脂轉(zhuǎn)錄因子骨鈣素Il鄭州大學(xué)2006屆碩士畢業(yè)論文英文摘要steroidInducesDi圩erentiationofMarllDwst珊maICeIIsintoAdipOcytesPostgraduateCaoYaweiTutorⅥ，uxuejiallDepartmentofOnhopaedics，TheF主rstAmliatedHospitalofZhengzhouUniVersityAbsh鼉ctTheOsteonecrosisofthef

6、emoralhead(ONFH)鋤ongwhichthemostcaseswereiIlducedbySteroid，isacommondisease．ItoftenoccursaIldcausesdisabilitiesin曲nic．Previousstudiesshowedthatstemidmayinducemaffowstromalcells(Mscs)todif純r(jià)entiateiIltoadipocytesfollowedbysyst咖icchangesinIipidmetabolism，andthenosteonecrosiseventuallydcvel叩s．Plcnt

7、yofcxperimentationsOnanimalsalsogiVeusthes鋤eresull．ButthcrewereVeryfcwreportsOnhum髓Marrowst舢a(chǎn)lceIlsso翩：wbisolated，obtained缸dnu咖fedtheofi百nalhumanMarrowstfomalcells，intowhichdexameth嬲Onewasadded．T1leefEectsofdex鋤etIl髂0ne帆hum鋤