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《柑橘潰瘍病菌的分子鑒定及檢測(cè)技術(shù)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文柑橘潰瘍病菌的分子鑒定及檢測(cè)技術(shù)研究姓名：羅志萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：洪霓20060601華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)位論文是否保密奄如需保密，解密時(shí)間年月日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意．研究生簽名：
2、、羅冬《時(shí)間：2卯占年么月2Ⅵ學(xué)位論文作粼：、羅樂備導(dǎo)黼：／毿簽名日期：D6年占月n日簽名日期：形年占月：LI-EI注：請(qǐng)將本表直接袈訂在學(xué)位論文的扉頁和目錄之聞?wù)涕贊儾?CitrusBacterialCankerDisease，CBCD)為一種由地毯草黃單胞桿菌柑橘致病變種(Xanthomonasaxonopodispv．citri，Xae)弓l起的細(xì)菌性病害，該病害對(duì)柑橘生產(chǎn)危害嚴(yán)重，世界許多國家將其列為重要檢疫性病害。目前，國內(nèi)外均十分重視該病原菌的鑒定和檢疫檢驗(yàn)技術(shù)研究，在包括分子生物學(xué)鑒定方法在內(nèi)的多種快速檢疫鑒定技術(shù)研究中取得重要進(jìn)展。本研究對(duì)來源于湖北的
3、一個(gè)表現(xiàn)柑橘潰瘍病類似癥狀的柑橘樣品上的病原菌進(jìn)行了分子鑒定，并從生物學(xué)、PCR和免疫熒光技術(shù)3個(gè)方面對(duì)柑橘潰瘍病菌的快速檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了研究，取得如下研究結(jié)果：1．從表現(xiàn)類似柑橘潰瘍病的柑橘干葉上共分離到形成4種不同菌落的細(xì)菌。分別對(duì)來源于南京的陽性對(duì)照菌株、病斑研磨液)(o及分離獲得的4個(gè)菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中陽性對(duì)照菌株和病斑研磨液)(o均擴(kuò)增出一條與預(yù)期大小一致的413bp的目標(biāo)片段；而從分離到的)(4中擴(kuò)增出大小為500--600bp的片段；從水稻白葉枯病菌、xl、x2和x3中未擴(kuò)增出任何片段。分別對(duì)以上擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆和測(cè)序，結(jié)果表明，來源于南京(NJ．XC)的對(duì)
4、照菌株和湖北病葉研磨液的克隆片段全長(zhǎng)均為413個(gè)核苷酸，與Silva等(2002)報(bào)道的相應(yīng)序列相似性分別為99％(411／413)和100％(413／413)。從分離菌)(4中擴(kuò)增出的片段全長(zhǎng)557bp，GenBankBlast(nO檢索結(jié)果表明該片段與根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)的一個(gè)片段高度相似，部分片段相似性為93％(484／515)。2．用濃度為103cfu／ml的柑橘潰瘍病菌培養(yǎng)液針刺法接種7個(gè)柑橘品種離體葉片后，表現(xiàn)出不同的發(fā)病情況。其中福本、紅肉臍、紐荷爾橙、墨西哥萊檬和枳殼發(fā)病均較快，癥狀明顯，而粗檸檬和鄧肯葡萄柚的癥狀
5、表現(xiàn)不明顯，僅出現(xiàn)了黃褐色壞死現(xiàn)象。3．分別采用氯仿／異戊醇方法提取的DNA和蛋白酶K裂解液作模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中以提取的DNA作模板，從來自南京、四川和湖北的3個(gè)柑橘潰瘍病菌株NJ．XAC、SC-XAC和HB．XAC中均擴(kuò)增出了預(yù)期大小413bp的目標(biāo)片段；直接用裂解液作模板在相同條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從NJ-XAC和SC．XAC中也擴(kuò)出了目標(biāo)片段，但其電泳條帶相對(duì)較弱。4．用濃度為1×10Jcfu／ml的菌液經(jīng)涂片、BSA封閉、抗體結(jié)合和熒光顯微觀察，結(jié)果顯示，30℃下用BSA封閉2h，30℃下抗體結(jié)合lh，熒光抗體濃度為4ug／ml，室溫放40min后鏡檢，就可以
6、在熒光顯微鏡下清晰地觀察到柑橘潰瘍病菌菌體發(fā)出綠色熒光。關(guān)鍵詞：柑橘潰瘍病菌PCR致病性試驗(yàn)免疫熒光柑橘AbstractCitrusbacterialcankerdisease(CBCD)，causedbyXanthomonasaxonopodispv．cirriVauterineta1．isaseriousdiseaseofmostcitrusspeciesandeultivars．Thepathogenehavebeenappearedinlistsofquarantinepestsinmanycontries．Untilnowmuchattentionwaspayed
7、tothestudiesondetectionandinspection，andgreatprogresseshavebeenmade．Inthisstudy，asampleshowingCBCDsymptomsWascollectedfromHubeiandtheXanthomonasaxonopodispv．citriWasidentificatedbasedonitsmolecularinformation．Biologicalindexing，PCRbasedonapairofprimerscorrespo
