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《小鼠Oct4基因的克隆及其真核表達載體的構(gòu)建》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中文摘要目的：Oct4是第一個被發(fā)現(xiàn)只在多能細胞中表達的轉(zhuǎn)錄因子，其功能被認為是控制細胞多能性的決定性因素。Oct4的這種作用機制目前并未明確，本研究將克隆小Roct4基因，構(gòu)建其真核表達載體pEGFP-N2．Oct4，為今后能進一步研究小鼠Oct4基因的生物學功能奠定實驗基礎(chǔ)。方法：用TRIzolReagent提取小鼠胚胎干細胞總RNA，并經(jīng)反轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應獲得小鼠Oct4DNA，將該基因連接克隆到含有增強型綠色熒光蛋白報告基因的真核表達載體pEGFP-N2上，以構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP．N2一OCT4。結(jié)果：獲取小鼠胚胎干
2、細胞OCT4基因的全序列eDNA。將能發(fā)出綠色熒光的增強型綠色熒光蛋白報告基因融合OCT4基因構(gòu)建OCT4eDNA真核表達質(zhì)粒，酶切后經(jīng)DNA電泳鑒定及DNA澳]序證實準確無誤。結(jié)論：成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pEGFP-N2一OCT4，將增強型綠色熒光蛋白報告基因融合在OCT4基因的3’端，既保留了OCT4的生物學活性，又便于在研究OCT4生物學功能實驗中可檢測到蛋白表達。關(guān)鍵詞：小鼠；Oct4；真核表達載體；質(zhì)粒pEGFP-N2lIAbstractobjectives：ABSTRACTToclonemouseOct4andconst
3、ructitseukaryoteexpressionvector，∞astoprovidebasisfortheresearchofitsbiologicalfunction．Methods：TheexperimentswereconductedinJiangxiKeylaboratoryofMolecularMedicalSciencefromJanurary2007toSeptember2007．ThetotalRNAWasisolatedbyTRIzolReagentfrommouseembryonicstemcellsa
4、nditseDNAWasgainedbyRT—PCR．TheOCT4genewasclonedintoeukaryoticexpressionvectorpEGFP-N2ofEGFPreportedgeneencodinggreenfluorescenceproteinintheformoffusionprotein，∞astorebuildpEGFP—N2一Oct4．Results：ThetotalcDNAencodingofOCT4geneWasobtained．OCT4geneWasclonedintoeukaryotic
5、expressionvectorpEGFP-N2ofEGFPreportedgeneencodinggreenfluorescenceproteinintheformoffusionprotein．OCT4geneintherecombinantplasmidpEGFP-·N2·-OCT4wasexactlyconf'muedbyDNAsequencingandDNAelectrophoresisafterenzymerestriction．Conclusion：Theexpressionvectorofrecombinantp
6、lasmidpEGFP-N2一OCT4issuccessfullyconstructed．The3'endofOCT4geneisfused麗meukaryoticexpressionvectorpEGFPoN2ofEGFPreportedgeneencodinggreenfluorescenceproteinandthebiologicalactivityofOCT4iskept，whichCancontributetothedetectionofproteinexpressionintheresearchofitsbiolo
7、gicalfunction．KeyWords：mouse：Oct4：EukaryonExperssionVector；pEGFP-N2111學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名(手寫)：磁石晦簽字日期：沙口脾多月I7日學位論文版
8、權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解南昌大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編
