《滅菌與除菌》PPT課件

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1、第四節(jié)——無菌檢查與染菌的處理2、造成發(fā)酵染菌的可能途徑有哪些？1、什么叫發(fā)酵染菌?3、染菌會對發(fā)酵工業(yè)造成哪些不良影響？4、在現(xiàn)有科學條件下能否做到徹底不染菌？據(jù)報道，國外抗生素發(fā)酵平均染菌率為2%-5%，國內的青霉素發(fā)酵染菌率2%，鏈霉素、紅霉素和四環(huán)素發(fā)酵染菌率約為5%，谷氨酸發(fā)酵噬菌體感染率1-2%。發(fā)酵過程危害最大的雜菌種類青霉素的發(fā)酵鏈霉素的發(fā)酵四環(huán)素的發(fā)酵谷氨酸的發(fā)酵檸檬酸的發(fā)酵細短產氣桿菌細短桿菌、假單孢桿菌雙球菌、芽孢桿菌、莢膜桿菌噬菌體青霉菌不同雜菌的種類對發(fā)酵的影響一、染菌隱患的檢查顯微鏡檢查法染菌隱患的檢查肉湯培養(yǎng)法酚紅肉湯培養(yǎng)基染菌隱患的檢查平板劃線培養(yǎng)或斜面

2、培養(yǎng)檢查法以平板劃線和肉湯培養(yǎng)結果為主要根據(jù)要定期取樣，取樣時防止外界雜菌混入倒平板空培養(yǎng)待測樣品劃線培養(yǎng)觀察注意事項2、無菌試驗的肉湯或培養(yǎng)平板應保存并觀察至本批（罐）放罐后12h，確認為無雜菌后才能棄去。3、無菌試驗期間應每6h觀察一次無菌試驗樣品，以便能及早發(fā)現(xiàn)染菌?；?、無菌試驗時，如果連續(xù)3個時間的肉湯發(fā)生變色反應或產生混濁，或平板培養(yǎng)連續(xù)三次發(fā)現(xiàn)有異常菌落的出現(xiàn)，即可判斷為染菌。染菌隱患的檢查發(fā)酵過程的異?，F(xiàn)象觀察法溶氧異常排氣中的CO2異常變化雜菌是好氣性微生物，溶解氧在較短時間內下降，直至接近于零，且在長時間內不能回升；雜菌是非好氣性微生物，而生產菌由于受污染而抑制生長

3、，使耗氧量減少，溶解氧升高。雜菌污染時，糖耗加快，CO2含量含量增加；噬菌體污染后，糖耗減慢，CO2含量減少。還可以根據(jù)其他的一些異?，F(xiàn)象，如菌體生長不良、PH值的異常變化、發(fā)酵過程中泡沫的異常增多、發(fā)酵液的顏色異常變化、代謝產物含量的異常下跌、發(fā)酵周期的異常拖長、發(fā)酵液的粘度異常增加等判斷染菌。其它異常現(xiàn)象回染菌率的統(tǒng)計以發(fā)酵罐染菌批(次)為基準，染菌罐批(次)應包括染菌重消后的重復染菌批(次)在內。整個發(fā)酵周期中，無論前期或后期染菌，均作“染菌”論處。染菌率(％)=發(fā)酵(罐)染菌批(次)／總數(shù)罐批(次)*100%二、發(fā)酵染菌的原因對整個發(fā)酵過程的危害極大。嚴重干擾生產菌的生長繁殖。

4、干擾生產菌的代謝，影響產物的生成。影響相對較小。不同生產階段染菌對發(fā)酵的影響種子培養(yǎng)期染菌發(fā)酵后期染菌發(fā)酵前期染菌發(fā)酵中期染菌將導致染菌范圍不斷擴大，使生產蒙受重大損失。使發(fā)酵大面積染菌。一般不具延續(xù)性，使單個（批）發(fā)酵罐發(fā)酵失敗。染菌幾率較大。不同染菌原因對發(fā)酵的影響種子帶菌設備滲漏空氣帶菌培養(yǎng)基或設備滅菌不徹底染菌原因的分析國外一發(fā)酵工廠的染菌原因分析染菌原因的分析國內一發(fā)酵企業(yè)染菌的原因分析a.從染菌的規(guī)模來分析染菌原因大批發(fā)酵罐染菌：空氣系統(tǒng)部分發(fā)酵罐(或罐組)染菌：前期可能是種子帶雜菌，或滅菌不徹底，中后期則可能是中間補料系統(tǒng)或消沫劑管路系統(tǒng)發(fā)生問題所造成的個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌

5、：設備問題(如閥門的滲漏或罐體腐蝕磨損)，設備及管路滅菌死角個別發(fā)酵罐偶然染菌：原因比較復雜，因為各種染菌途徑都可能引起。b.從染菌的時間來分析發(fā)酵早期染菌：種子帶菌、培養(yǎng)基和設備滅菌不徹底、設備或管道有死角中、后期染菌：中間補料、設備滲漏、操作不合理c.從染菌的類型來分析耐熱性芽抱桿菌：死角或滅菌不徹底球菌、酵母：空氣凈化系統(tǒng)、冷卻系統(tǒng)霉菌：滅菌不徹底或無菌操作不嚴格三、雜菌污染后的挽救和處理種子培養(yǎng)期染菌的處理種子罐染菌發(fā)酵罐×備用種子有無重新制備種子物料管道供氣管道徹底滅菌雜菌污染后的挽救和處理發(fā)酵前期染菌的處理培養(yǎng)基中碳、氮含量高終止發(fā)酵，重新滅菌再接入種子進行發(fā)酵培養(yǎng)基中碳、

6、氮消耗量多放掉部分料液，加入新鮮料液，重新滅菌再接入種子進行發(fā)酵雜菌污染后的挽救和處理發(fā)酵中后期染菌的處理輕微染菌適當加入殺菌劑或降低溫度、控制補料量。代謝產物已達一定水平產品的含量達一定值，只要明確是染菌也可放罐加熱至１２0℃，保持30分鐘后排放無提取價值的發(fā)酵液雜菌污染后的挽救和處理染菌后對設備的處理加熱滅菌至120℃以上、保持30min后才能使用甲醛熏蒸或溶液浸泡12h以上處理四、預防噬菌體的危害利用細菌或放線菌進行的發(fā)酵容易感染噬菌體噬菌體直徑約0.1微米，可以通過細菌過濾器，所以通用的空氣過濾器不易將其除去。引起原因：設備的滲漏空氣系統(tǒng)、培養(yǎng)基滅菌不徹底噬菌體的防治措施加入噬

7、菌體抑制劑將培養(yǎng)液重新滅菌再接種（噬菌體不耐熱，７０－８０℃經(jīng)５分鐘即可殺死）。補入適量的未感染噬菌體的發(fā)酵液或促使菌種生長的生長因子，抑制噬菌體的生長。五、防止染菌的要點（一）強化空氣凈化過程1．空氣凈化流程的選擇2．過濾介質的選擇3．過濾介質的填裝4．空氣凈化系統(tǒng)的管理（二）原料的預處理1．原料除雜：防止機械受磨損2．粉碎：減少固體的團塊3．浸泡：使營養(yǎng)物質便于菌體的利用4．糊化、和糖化：大分子物質分解為小分子物質，易于菌體利用飽和蒸汽，嚴