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1、基于均相免疫技術(shù)的真菌毒素檢測(cè)研究StudyoftheMycotoxinDetectionBasedonHomogeneousImmunoassayTechnology工程領(lǐng)域：儀器儀表工程研究生：吳震指導(dǎo)教師：徐可欣教授天津大學(xué)精密儀器與光電子工程學(xué)院二零一七年十一月摘要真菌毒素是由真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝物，在農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)、加工、運(yùn)輸及儲(chǔ)藏過(guò)程中產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)較高。大部分真菌毒素具有致癌、致畸和致突變毒性，嚴(yán)重威脅到人體健康，對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)危害較大。因此，開(kāi)發(fā)一種高靈敏度、方便、快速的真菌毒素檢測(cè)方法，具有十分重要的研究意義和應(yīng)用價(jià)值。目前，對(duì)于真菌毒素的檢測(cè)，常用的方法有薄層層析法（TLC）、高效液相
2、色譜（HPLC）、氣相色譜（GC）、質(zhì)譜分析（MS）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）等。TLC法樣品前處理過(guò)程繁瑣，HPLC法所需檢測(cè)試劑和儀器設(shè)備昂貴，GC法檢測(cè)儀器使用成本高、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)；MS法往往需要與HPLC法或者GC法聯(lián)用，檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，ELISA法操作復(fù)雜，定量分析能力差，這些缺點(diǎn)也制約了其在真菌毒素現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)中的應(yīng)用。光激化學(xué)發(fā)光均相免疫檢測(cè)法不僅靈敏度高，而且實(shí)現(xiàn)了一步、免清洗檢測(cè)，操作過(guò)程簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，很容易實(shí)現(xiàn)小型化和自動(dòng)化檢測(cè)。本文針對(duì)真菌毒素現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)需要，研究了基于光激化學(xué)發(fā)光均相免疫分析技術(shù)的真菌毒素檢測(cè)方法。首先，研究了該方法的檢測(cè)原理，根據(jù)其測(cè)量原理構(gòu)建了
3、自制高通量均相免疫分析系統(tǒng)。其次，研究了兩種危害性較大的常見(jiàn)毒素，黃曲霉毒素B1與嘔吐毒素的檢測(cè)方法，采用競(jìng)爭(zhēng)法，通過(guò)待測(cè)樣品與生物素化完全抗原競(jìng)爭(zhēng)性的與單克隆抗體結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。然后，分別根據(jù)免疫反應(yīng)與均相檢測(cè)步驟，研究了黃曲霉毒素B1和嘔吐毒素的最佳檢測(cè)條件。最后，優(yōu)化結(jié)果，建立了適用于不同生物毒素檢測(cè)的檢測(cè)方法與標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法可分別實(shí)現(xiàn)黃曲霉毒素B1的最低檢測(cè)限為0.048ng/mL，最低定量限為0.22ng/mL，批內(nèi)與批間變異系數(shù)均小于10%，植物油樣品中AFB1的加標(biāo)回收率在87%~105%之間；嘔吐毒素的最低檢測(cè)限為0.069ng/mL，最低定量限為0.91
4、ng/mL，批內(nèi)與批間變異系數(shù)均小于11%，植物油樣品中DON的加標(biāo)回收率在87.8%~106.0%之間。綜上所述，光激化學(xué)發(fā)光均相免疫檢測(cè)技術(shù)可滿足農(nóng)產(chǎn)品中真菌毒素的快速便捷和高通量的檢測(cè)需求，在真菌毒素現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：光激化學(xué)發(fā)光；均相免疫檢測(cè)；黃曲霉毒素B1；嘔吐毒素IABSTRACTMycotoxinsaresecondarymetabolitesproducedbyfungi，whicharelikelytoemergeinthegrowth,store,transportationandprocessingofagriculturalproducts.
5、Mostofthemycotoxinshavecarcinogenic,teratogenicandmutagenictoxicities,whichseriouslyendangerthehealthofhumansandcausegreatharmtothesocio-economic.Therefore,thedevelopmentofahighlysensitive,convenientandrapidmethodofdetectionofmycotoxinshasveryimportantresearchsignificanceandapplicationvalue.Atprese
6、nt,thedetectionmethodsofmycotoxinsmainlyincludethinlayerchromatography(TLC),highperformanceliquidchromatography(HPLC),gaschromatography(GC),massspectrometry(MS),enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).ThedrawbacksoftheTLCarethatthesamplepreparationprocessiscumbersome;thedisadvantagesoftheHPLCmethoda
7、rethatthereagentsandinstrumentsrequiredareexpensive;theGCmethodhasthedisadvantagesofhighcostoftestingequipment;theMSmethodoftenneedstobecombinedwithHPLCorGCmethod,andthedetectionprocessiscomplex;theELISAmet
