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《E-鈣黏素和β-連環(huán)蛋白在小鼠角膜上皮損傷修復(fù)中的表達(dá)變化和黏附增殖作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文縮略詞表縮略詞表英文縮寫英文全稱中文全稱AbAntibody抗體BSABovineselllmalbumin牛血清白蛋白CKCytokeratin細(xì)胞角蛋白Cx43Connexin43細(xì)胞縫隙連接蛋白43DEPCDiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMEMDulbecco’SmodifiedEagle’smediumDulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基DTTDithiothreitol二硫蘇糖醇EDTAEthylenediaminetetra—aeticacid乙二胺四乙酸FACSFluorescence-ac
2、tivatedcellsorter流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀FBSFetalbovineSelalm胎牛血清FITCFluoresceinisothiocyanate異硫酸酯熒光素HEHemotoxylinandeosinstaining蘇木精．伊紅染色ODOpticaldensity光密度PBSPhosphatebufferedsolution磷酸鹽緩沖液PCRPolymeraseChainReaction聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)rpmRevolutionsperminute轉(zhuǎn)，分鐘Real-timeFQ—PCRReal—timefluorescentquantita
3、tivePCR實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RT．PCRReversetranscriptase—polymerasechain逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)reactionSDSSodiumdecdecylsulfate十二烷基硫酸鈉SEMScanningElectronmicroscope掃描電鏡TeMTransmissionElectronmicroscope透射電鏡UIJnit酶活單位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是我個(gè)人在導(dǎo)帥指導(dǎo)下進(jìn)行的研究]．作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對(duì)
4、本研究的肩發(fā)和所做的負(fù)獻(xiàn)均已在論文t4·作了明確的聲明并表示了謝意。作背簽名蔓魚盛論文使用授權(quán)聲明日{(diào)}1]：趣2：』：』本人完全了解復(fù)旦人學(xué)自‘關(guān)保留、使JfJ學(xué)位論文的規(guī)定，H口：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件，允n+論文被查閱禾J借閱：學(xué)?？贘‘以公布論文的全部或部分內(nèi)容，·，】_以采朋1影印、縮印或其它復(fù)制手段保存淪文。保密的論文在解密后遵守此覘定。?名：掣剮鼢醛慨—型復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的通過角膜上皮刮除，建立角膜損傷模型，探討E-cadherin和13-catenin在小鼠角膜創(chuàng)傷愈合過程中的表達(dá)變化和對(duì)創(chuàng)傷愈合的作用，并對(duì)兩者之間
5、的相互作用及與此可能相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路做初步研究。方法選擇6—8周的C57BL／6J小鼠，通過刮除角膜上皮，制作角膜損傷模型。將角膜損傷后的小鼠根據(jù)時(shí)間隨機(jī)分成7組，分別為損傷后3h、6h、9h、12h、18h、24h和48h組。對(duì)角膜進(jìn)行熒光素染色，在裂隙燈下觀察、照相，并用LeicaQWin軟件計(jì)算角膜損傷面積。光、電鏡下觀察角膜組織結(jié)構(gòu)。AE5免疫熒光染色，并結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)，對(duì)角膜上皮刮傷修復(fù)過程中的細(xì)胞進(jìn)行系統(tǒng)的觀察與分析。用RT—PCR和免疫熒光染色檢測(cè)正常小鼠角膜組織中E—cadherin和13-catenin的表達(dá)。通過Real．ti
6、mePCR和WesternBlot方法檢測(cè)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)E—cadherin和p-catenin的mRNA、全蛋白和胞漿蛋白表達(dá)變化情況。采用免疫熒光染色法檢測(cè)p-catenin和磷酸化13-catenin(Ser33／37／Thr41)分布特點(diǎn)。Real-timePCR檢測(cè)Cx43的表達(dá)變化，RT-PCR檢測(cè)PCNA及CyclinDl的mRNA表達(dá)情況。結(jié)果熒光素染色、HE和電鏡顯示角膜上皮刮除后6h，細(xì)胞開始遷移，創(chuàng)口損傷面積開始顯著減小，到24h創(chuàng)口基本再上皮化，48h上皮形態(tài)和連接結(jié)構(gòu)恢復(fù)到正常。AE5熒光染色顯示覆蓋創(chuàng)口區(qū)域的細(xì)胞均呈陽
7、性免疫反應(yīng)。流式細(xì)胞術(shù)可見凋亡率在6h達(dá)到最高值，以后凋亡率逐漸下降，至損傷后24h基本趨于正常。細(xì)胞周期分析示s期細(xì)胞在9h開始增多，至24h達(dá)到頂峰，觀察的24h內(nèi)只發(fā)生一次增殖。E-cadherin和13-cateninmRNA在正常小鼠角膜中有表達(dá)。免疫熒光染色顯示E-cadhedn主要表達(dá)在角膜上皮細(xì)胞胞膜，13-catenin在角膜的上皮、基質(zhì)和內(nèi)皮層均有表達(dá)。Real—timePCR顯示，損傷后3hE-cadhedn和13-catenin表達(dá)均升高，并達(dá)最高，之后持續(xù)下降。WesternBlot顯示，E．．cadherin蛋白在損傷后
8、3h～18h均比正常低，至24h表達(dá)開始增多，48h蛋白表達(dá)明顯增多。13-catenin全蛋白在損傷后3h到12h表達(dá)沒
