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《載脂蛋白E基因敲除小型豬的建立及肝臟表型分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類號(hào)：Q95-33單位代碼：10183研究生學(xué)號(hào)：2015882004密級(jí)：公開(kāi)研載脂蛋白E基因敲除吉林大學(xué)小型豬碩士學(xué)位論文的建立（學(xué)術(shù)學(xué)位）及肝臟載脂蛋白E基因敲除小型豬的建立及肝臟表型分析表型KnockoutApolipoproteinEgeneofGuangxiMinipigto分析buildAtherosclerosisModels&HepaticPhenotypeAnalysis立作者姓名：沈梓盈沈?qū)I(yè)名稱：動(dòng)物學(xué)梓盈領(lǐng)域（方向）：基因編輯動(dòng)物模型指導(dǎo)教師：任文陟培養(yǎng)單位：動(dòng)物科學(xué)學(xué)院2018年6月吉林大學(xué)載脂蛋白E基因敲除小型豬的建立及肝臟表型分析
2、KnockoutApolipoproteinEgeneofGuangxiMinipigtobuildAtherosclerosisModels&HepaticPhenotypeAnalysis作者姓名：沈梓盈專業(yè)名稱：動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師：任文陟教授學(xué)位類別：理學(xué)碩士論文答辯日期：2018年6月4日中文摘要載脂蛋白E基因敲除小型豬的建立以及肝臟表型分析在我國(guó)尤其是北方城市，心臟血管疾病有著非常高的發(fā)病率和致死率，這和環(huán)境及民眾的飲食結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系。動(dòng)脈粥樣硬化是以冠心病、腦梗死等心血管疾病的主要誘因，主要由脂質(zhì)代謝紊亂造成。動(dòng)脈粥樣硬化不僅和脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)相關(guān)，而且
3、和高膽固醇血癥的關(guān)系十分密切。動(dòng)脈粥樣硬化屬于慢性病，誘發(fā)因素較多，一旦發(fā)病嚴(yán)重時(shí)可以致命。1973年人們?cè)诔兔芏戎鞍字邪l(fā)現(xiàn)了載脂蛋白E在血漿脂蛋白代謝中具有重要作用，可以調(diào)節(jié)酶活性、運(yùn)輸脂質(zhì)、引導(dǎo)血漿脂蛋白同細(xì)胞表面受體結(jié)合。ApoE的多態(tài)性不僅可以影響其結(jié)合脂質(zhì)能力，而且和神經(jīng)退化疾病、心血管動(dòng)脈粥樣硬化疾病有相關(guān)性，且不同亞型對(duì)疾病的易感性也不同。ApoE和疾病的關(guān)系在動(dòng)物身上研究較為廣泛，如apoE基因敲除鼠和apoE基因敲除兔的膽固醇水平都顯著升高，可以發(fā)展為高脂蛋白血癥、動(dòng)脈粥樣硬化。但是這些轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型也并是完美的動(dòng)脈粥樣硬化模型。鼠模型體積過(guò)
4、小，不適合采樣和外科手術(shù)操作，而且脂蛋白以HDL為主，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化有保護(hù)作用；兔子模型雖然易于操作，但對(duì)飲食敏感，而且缺少肝臟酶活性，長(zhǎng)期高膽固醇飲食會(huì)導(dǎo)致肝臟中毒，斑塊損傷位置和人類也不同。如果能建立體積合適，基因性狀、代謝功能和人類更相似的動(dòng)物模型，對(duì)研究人的動(dòng)脈粥樣硬化疾病以及其和apoE的關(guān)系意義重大。人類的基因組和豬最為相似，而且豬和人類的心血管系統(tǒng)生理解剖學(xué)結(jié)構(gòu)也很相似。很多研究表明豬也易患高血壓、高血脂等與人類極為相似的心血管疾病，尤其是動(dòng)脈粥樣硬化。不僅如此，小型豬的血管斑塊損傷分布情況、成熟斑塊特點(diǎn)也和人類基本一致。更重要的是小型豬體積適中，易
5、于操作，實(shí)用性強(qiáng)。本論文主要采用新的基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9，目的是敲除巴馬香豬胎兒成纖維細(xì)胞中apoE基因，篩選出敲除成功的單克隆細(xì)胞后，通過(guò)體細(xì)胞核移I植、胚胎移植技術(shù)，建立apoE基因敲除小型豬模型。我們通過(guò)分析新生仔豬肝臟中脂質(zhì)含量、蛋白表達(dá)以及其他相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)新生仔豬跟野生型相比：1）apoE的mRNA水平幾乎為0，westernblot結(jié)果也顯示肝臟內(nèi)無(wú)apoE蛋白表達(dá)；2）肝臟的膽固醇含量、甘油三酯水平更高，游離脂肪酸含量、HDL-C和LDL-C差異不顯著；3）脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)因子PPAR水平差異不顯著、SRBⅠ的表達(dá)水平低，
6、脂肪酸酶FADS1、FADS2表達(dá)量較低；4）抗炎因子IL-4、IL-10表達(dá)水平低，而炎性因子IL-6、MCP-1無(wú)太大差異，TNF-α、IFN-γ表達(dá)水平高。從這些數(shù)據(jù)我們可以看出，apoE基因敲除后，新生仔豬和野生型相比，肝臟膽固醇和甘油三酯含量都相對(duì)較高，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的脂肪酸酶和具有協(xié)助反轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇功能的SRBⅠ表達(dá)水平較低，說(shuō)明肝臟內(nèi)脂質(zhì)會(huì)不斷積累，對(duì)身體健康形成負(fù)擔(dān)；而炎性因子TNF-α、IFN-γ表達(dá)量高，抗炎因子IL-4、IL-10表達(dá)量低，說(shuō)明apoE基因敲除豬的炎癥反應(yīng)會(huì)加劇。膽固醇和甘油三酯不斷積累，膽固醇和脂肪酸代謝能力降低，炎癥因子的大量
7、表達(dá)，這些都會(huì)形成并推進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，這種模型是研究人動(dòng)脈粥樣硬化和apoE關(guān)系的最理想模型，對(duì)治療和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化都具有指導(dǎo)作用。關(guān)鍵詞：載脂蛋白E、動(dòng)物模型、CRIPSR/Cas9系統(tǒng)、肝臟、脂質(zhì)、炎癥。IIAbstractKnockoutApolipoproteinEgeneofGuangxiMinipigtobuildAtherosclerosisModelsInourcountry,especiallynorthcities,cardiovasculardiseaseshavehighmorbidityandmortalitywhichrelat
8、edtoe
